克瘤丸体外对人肺癌细胞株A549抑制作用探究.doc

克瘤丸体外对人肺癌细胞株A549抑制作用探究 　【摘要】 　　目的研究中药复方克瘤丸3种提取方法的提取物体外对人肺癌细胞株A549抑制作用，探讨克瘤丸剂型改革的方向。方法采用MTT法测定克瘤丸3种提取方法的提取物对人肺癌细胞株A549增殖的抑制作用。结果克瘤丸组合提取法取得的提取物抑制率明显高于其他两种提取方法；当药物浓度为5 mg/ml时，对肺癌细胞有明显的抑制作用；克瘤丸对肺癌细胞株增殖的抑制呈一定的时间和浓度的依赖性，随着时间和浓度的增加逐渐增强。结论克瘤丸体外具有显著抑制人肺癌细胞株A549的作用，组合提取法有望成为今后剂型改革的研究方向。 【关键词】 克瘤丸； 提取方法； 人肺癌细胞株A549 　　Abstract：ObjectiveTo compare the inhibitory influence among three distill methods of KeLiu pill on the proliferation of human lung cancer cell line A549 and to research the best form of medication. MethodsKeLiu pill was extracted by three methods, and the effects of three extracts on human lung cancer cell line A549 were observed by MTT assay. ResultsThe inhibitory rate of KeLiu pill extracted by integrated extracted method was the best, and it had remarkable inhibitory effect on human lung cancer cell line A549 at the concentration of 5-10mg/ml. In addition, the inhibition of KeLiu pill on proliferation of cell growth was in time-depended manner to some degree and the effect was enhanced with time. ConclusionKeLiu pill has remarkable effect influence on human lung cancer cell line A549 in vitro. Integrated extracted method is valuable form of medication. 　　Key words：KeLiupill; Distill method; Human lung cancer cell line A549 　　我科在学习历代中医文献，结合多年临床经验和反复临床实践的基础上，围绕肺癌的病机特点，提出了“祛瘀解毒，扶正抗癌”的治疗大法，创研出治疗晚期非小细胞肺癌具有较好疗效的克瘤丸制剂（苏药制字 。克瘤丸用于临床已有7年之久，临床实践证明，克瘤丸具有一定的稳定瘤体、抑制肿瘤生长的效果，与化疗合用具有提高疾病控制率的作用［1，2］。实验研究显示克瘤丸对动物移植性肿瘤有明显的抑制作用［3］和免疫提高作用［4］。鉴于克瘤丸在临床抑癌、抗转移中所显示的良好效果，本实验将通过克瘤丸对人肿瘤细胞的生长抑制作用的实验研究，从体外的研究中验证克瘤丸的抗肿瘤作用。由于克瘤丸的剂型为丸剂，制作方法为研末，水泛为丸，每天15 g的剂量，需服用3瓶盖，有些病人不易接受，本实验试图进行改进剂型的摸索以期找到合适的浓缩剂型。 　　1 材料 　　1.1 实验细胞株人肺腺癌A549细胞株由本实验室常规培养，生长于含10%小牛血清的RPMI1640完全培养液中，37℃恒温，5%CO2，饱和湿度培养箱中生长。取对数生长期细胞用于实验。 　　1.2 试剂RPMI1640培养液(GIBCO公司产品)；MTT(sigma公司产品，以生理盐水配制成5 mg/ml浓度)；二甲基亚砜（DMSO，上海凌峰公司产品，分析纯）。 　　1.3 克瘤丸购自江苏省中医院药房，批 　　2 方法 　　2.1 克瘤丸不同提取物的制备 　　2.1.1 样品Ⅰ组合提取法，取200 g粗粉CO2超临界萃取后，药渣醇提（70％乙醇）后合并提取液，微波真空干燥，即为样品I的浸膏（4.39 g粗粉/g）。 　　2.1.2 样品Ⅱ半仿生提取法，取200 g粗粉加pH为1酸水提取再加pH为8碱水提取，合并提取液，浓缩成