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党参多糖对神经干细胞硫代硫酸钠损伤保护作用 　 作者：武冰峰，杨娟，谢红，杨小生 【摘要】 　　目的研究党参多糖对神经干细胞硫代硫酸钠损伤的保护作用。方法采用离子交换柱层析和凝胶柱层析纯化得到党参多糖；取出大鼠胚胎纹状体进行神经干细胞培养，神经干细胞硫代硫酸钠损伤模型模拟脑梗死中神经元的缺氧性损伤。实验分正常对照组，硫代硫酸钠损伤组和将不同浓度党参多糖加入硫代硫酸钠损伤组培养液中的试验组。观察硫代硫酸钠损伤后各组神经干细胞死亡率和乳酸脱氢酶漏出率，研究党参多糖对神经干细胞硫代硫酸钠损伤的保护作用。 结果加入多糖的实验组神经干细胞损伤有不同程度的减轻。高浓度多糖实验组神经干细胞死亡率和乳酸脱氢酶漏出率较低，与硫代硫酸钠损伤组比较有显著性差异。 结论党参多糖对神经干细胞硫代硫酸钠损伤有明显的保护作用。 【关键词】 党参多糖 分离纯化 神经干细胞 硫代硫酸钠损伤 　　Abstract:ObjectiveTo study the protective effect of polysaccharide from Codonopsis pilosula (CPP-1) on neural stem cell injury induced by Na2S2O3. MethodsCPP-1 was obtained by ion change column chromatography and gel chromatography; the neural stem cells were cultured from the striatum of fetal mice and damaged by Na2S2O3 to simulate hypoxic-ischemic brain injury. The animals were divided into control group, Na2S2O3 group and test groups with different concentrations of polysaccharide. The cell death rate and LDH leakage were observed. ResultsThe neural stem cell damage of test groups were alleviated, the death rate of neural stem cells and LDH leakage in high concentration test group were induced much lower than those of Na2S2O3 group. ConclusionCPP-1 has remarkable protective effect on neural stem cell injury induced by Na2S2O3. 　　Key words:Polysaccharide; Codonopsis pilosula; Purification; Neural stem cells; Na2S2O3 damage 　　党参Codonopsis pilosula为桔梗科党参属植物,是我国传统补益药。味甘、性平、有补中益气、健脾益肺、生津的功效［1］。其主要活性成分之一党参多糖具有抗肿瘤［2］、增强免疫功能［3］、增强抗应激能力［4］及抗氧化等［5］多种药理活性，药理实验多用的是多糖粗品。本研究从党参中分离纯化得到一个分子量分布均一纯级分，并就其对神经干细胞硫代硫酸钠损伤的保护作用进行研究，为进一步加强党参多糖药理学研究，提高其应用价值提供科学依据。　　 　　1 器材与方法 　　1.1 试剂与仪器 　　党参 (贵阳市药材市场)；DEAE-纤维素 (上海试剂二厂)；Sepharose CL-6B (Pharmacia)；硫代硫酸钠为国产分析纯试剂；鼠抗巢蛋白（nestin）抗体(Chemicon)；Trizol (上海生工)；连有FITC荧光素的二抗(羊抗鼠)(上海基因公司)；多聚甲醛(华美公司)。紫外可见分光光度仪HP-8453（惠普公司）；电泳仪DYY-Ⅲ8B（北京市六一仪器厂）；免疫荧光显微镜（Olympus）；1815TC CO2培养箱（SHEL-LAB）；倒置显微镜（Nikon）。 　　1.2 方法 　　1.2.1 党参多糖的分离纯化 　　党参样品真空干燥至恒重后粉碎，用80%乙醇脱单糖及低聚糖，热水浸提多糖，党参提取液减压浓缩至适当体积后，用乙醇沉淀，乙醇最终浓度不低于80 %，沉淀干燥后得党参多糖粗品CPP。CPP用水溶解后上 DEAE-纤维素柱，依次用蒸馏水和不同浓度的NaCl溶液洗脱，洗脱液分部收集，用苯酚-硫酸法检测