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内生放线菌及寄主植物抑菌活性及其关系 　 作者：钟莉 田新莉 周敏 王韬 成秋香 陈振华 范云 覃重军 【摘要】 从68种中草药植物中分离了560株内生放线菌菌株，其中84株(约占15%)对金葡菌有抑菌活性，36株(约6%)对白念珠菌有抑菌活性，提示中草药植物的内生放线菌可能是抗菌新药的一个来源。检测了9种中草药植物的水或乙醇抽提液对金葡菌的抑菌活性，发现内生放线菌菌株的抑菌活性与其寄主植物没有明显的对应关系。 【关键词】 中草药植物； 内生放线菌； 抑菌活性 ABSTRACT This paper reports that total 84 or 36 out of the tested 560 endophytic actinomycetes strains from 68 Chinese medicinal herbs, showed inhibition activity against Staphylococcus aureus or Candida albicans, respectively, suggesting a potential source for novel antibiotics. Further investigation by using water or ethanol extracts of the nine herbs against Staphylococcus aureus, indicated no apparent relationships on inhibition of the pathogen between herbs and their endophytic actinomycetes. KEY WORDS Chinese medicinal herbs; Endophytic actinomycetes; Inhibition activity 目前发现的放线菌(主要来自土壤)产生的抗生素和生理活性物质超过10000种，占已发现微生物药物的约2/3［1］。近年来从独特生境中分离放线菌并寻找新的抗生素已逐渐受到重视，如从植物组织内部中分离其内生放线菌和寻找新抗生素［2］。我国拥有丰富的中草药植物资源，其中一些中草药长期被用来清热解毒、化脓消肿，提示可能存在抗菌活性物质。本文报道从68种中草药植物中分离大量的内生放线菌，其中约15%菌株具有抗金葡菌的活性，约6%菌株对白念珠菌有抑菌活性。此外，初步探讨了内生放线菌与其寄主植物在抗菌活性方面可能的对应关系。 1 材料与方法 1.1 中草药植物和病原菌来源 本试验所用大部分中草药植物采自上海植物园，丹参和灯盏花采自云南昆明(邱明华研究员提供)，青蒿采自四川酉阳(利民青蒿基地提供)，金葡菌由扬州大学微生物实验室金文杰老师提供。 1.2 培养基、试剂和抗生素 试验中分离内生放线菌所用的为S培养基［2］、S培养基+重铬酸钾+萘啶酮酸、S培养基+重铬酸钾+萘啶酮酸+链霉素、S培养基+重铬酸钾+萘啶酮酸+万古霉素等4种培养基(重铬酸钾的终浓度为85μmol/L，萘啶酮酸65μmol/L，链霉素2μg/ml，万古霉素4μg/ml)，纯化和进一步培养内生放线菌采用高氏一号培养基［3］。培养金葡菌用LB培养基。 1.3 植物内生放线菌的分离 将采摘的新鲜植物用清水洗净，根、茎、叶各部分分开，于阴凉处风干。用70%的乙醇、0.87%的次氯酸钠和10%的碳酸氢钠分别处理5、20和10min以达到表面消毒，接着用无菌水洗涤三次，再用无菌滤纸吸干水分。将植物剪成约1cm的小段，置于上述4种分离培养基表面，于30℃培养。样品表面消毒方法参照文献［4，5］，分离内生放线菌的方法参照文献［4］，根据形态和培养特征初步鉴定放线菌菌株参照文献［3］，部分放线菌菌株的鉴定采用16S rDNA序列测定和比对。 1.4 内生放线菌的抑菌试验 金葡菌或白念珠菌接种于25ml LB液体，37℃培养过夜，取10ml菌液与250ml LB混合，浇制成平板。植物内生放线菌菌株接种于高氏一号培养基，于30℃生长7d，用打孔器在平板上打孔，接种针挑出放线菌琼脂菌块，放置在混合有指示菌的平板上，30℃培养2～3d后观察和测量可能的抑菌圈。 1.5 植物的水或乙醇的提取及提取液的抑菌试验 将采摘的新鲜植物用清水洗净和风干，一份称取0.8g，用研磨碾碎后加入3.2ml 70%乙醇，隔一段时间振荡一次进行萃取；另一份称取0.1g，进行表面消毒(方法同上)，然后剪碎并转移至Eppendorf管，用研磨碾碎后加入0.4ml无菌水浸泡。将灭菌的圆形滤纸片(4mm)置于混合有指示菌的平板上，加入5μl水或醇提取液于滤纸片上，30℃培养2～3d后进行抑菌圈测定。