人工诱导猪链球菌氟喹诺酮耐药株的靶位突变分析-南京农业大学学报.PDF

南京农业大学学报摇 2009,32 (4): 133 137 摇 Journal of NanjingAgricultural University http:/ / nauxb郾njau郾edu郾cn 张雨菡, 姚杰, 陆承平, 等. 人工诱导猪链球菌氟喹诺酮耐药株的靶位突变分析 [J]. 南京农业大学学报,2009, 32(4): 133 137 人工诱导猪链球菌氟喹诺酮耐药株的靶位突变分析 张雨菡, 姚杰, 陆承平, 王丽平* (南京农业大学动物医学院, 江苏 南京 210095) 摘要: 以4株临床分离的对环丙沙星和恩诺沙星敏感的猪链球菌2型菌株为研究对象, 采用体外递增药物浓度的方法分 别诱导了其对环丙沙星和恩诺沙星耐药的菌株, 按CLSI推荐方法测定了环丙沙星和恩诺沙星对亲本敏感株和诱导耐药 株的MIC, 测定了亲本株和诱导耐药株的生长曲线, 并采用PCR 和基因测序的方法分析了诱导耐药株的DNA 回旋酶 (GyrA和GyrB) 和拓扑异构酶郁 (ParC和ParE) 耐药决定区 (QRDR) 的基因突变和氨基酸序列变化。 结果表明: 浓 -1 -1 度递增法成功诱导了猪链球菌对环丙沙星和恩诺沙星耐药性, 其MIC分别由0郾5 mg ·L 上升至128 mg ·L ; 与敏感株 比较, 恩诺沙星与环丙沙星诱导的耐药菌在gyrA 和gyrB, 或parC和parE耐药决定区的氨基酸序列有突变, 除了已报道 的与氟喹诺酮耐药相关的ParC 的Ser79Phe, GyrA 的Ser81Arg, GyrB 的Asp315Asn、 Ser285Leu 和 Glu354Lys及 ParE 的 Pro278Ser点突变外, 在诱导菌中还出现了一些不曾报道的突变位点和氨基酸缺失, 如 GyrA 的Gln118His 和 ParE 的 Asn297Tyr突变, GyrB的288~291位和ParC的62位氨基酸缺失。 结果提示: 逐步增加药物浓度可以诱导猪链球菌对氟 喹诺酮类抗菌药耐药性, 并导致主要靶位发生突变。 关键词: 恩诺沙星; 环丙沙星; 猪链球菌2; DNA 回旋酶; 拓扑异构酶郁; 靶位突变 + 中图分类号: R378郾1 2摇 摇 摇 文献标志码: A摇 摇 摇 文章编号: 1000 2030 (2009) 04 0133 05 Mutation analysis of induced fluoroquinolone鄄resistant mutants of Streptococcus suis in vitro ZHANG Yu鄄han, YAOJie, LU Cheng鄄ping, WANG Li鄄ping* (College of Veterinary Medicine, Nanjing Agricultural University, Nanjing210095, China) Abstract: To perform a systematic analysis of point mutations in the quinolone resistance determining regions (QRDRs) of the DNA gyrase and topoisomerasegenesofStreptococcussuis type2 strainafterinvitro exposuretostepwiseincreasingconcentrationsof enrofloxacin and ciprofloxacin. Four parent strains of S郾suis type 2 were chosen for stepwise exposure to increasing levels of enro鄄 floxacin and ciprofloxacin followed by sel