利用抑制消减杂交技术分离辣椒细胞质雄性不育育性恢复-园艺学报.PDF

园　艺 　学 　报 　2009 , 36 ( 10) : 1443 - 1449 A cta Horticu lturae Sin ica 利用抑制消减杂交技术分离辣椒细胞质雄性不育育 性恢复相关 EST 郭 　爽 , 沈火林 , 杨文才 , 杨 　娟 , 王 　雯 (中国农业大学农学与生物技术学院 , 北京 100193) 摘 　要 : 以辣椒 ( Caps icum annuum L. ) 细胞质雄性不育系 23A、12 1A , 和其相应的近等基因恢复系 23C、12 1C为试验材料 , 利用抑制消减杂交 ( SSH ) 技术成功构建了 CM S恢复基因诱导表达的消减 cDNA 文库 。结合高密度点阵膜杂交差异筛选 , 获得了 282 个阳性克隆 。通过测序 , 除去重复序列共得到 175个 U n ique ESTs。在 GenB ank上进行 BLA ST分析 , 55个 EST片段未找到对应的同源序列 , 可能代表了新基因; 120个 EST片段找到了对应的同源序列 , 包括 103个已知功能基因和 17 个未知功能基因。按照 M IPS功能 分类法 , 将其分为 14个功能组 , 涉及代谢 、胁迫应答 、蛋白活性 、转录因子 、信号转导等多方面的功能 。 关键词 : 辣椒 ; 细胞质雄性不育 ; 恢复基因; 抑制消减杂交 ; 差异表达 中图分类号 : S 64 13　　文献标识码 : A 　　文章编号 : 0513353X (2009) Isola tion of Fertility Restora tion rela ted EST s in Pepper Cy topla sm ic M a le Ster ility L ines U sing SSH GUO Shuang, SH EN Huolin , YAN G W encai, YAN G Juan , and WAN G W en ( Colleg e of A g ronom y and B iotechnology, Ch ina A g ricu ltu ra l Un ivers ity, B eij ing 100193, Ch ina) A b stract: To iso late fertility re storationrelated gene s in p epp er cytop la sm ic m ale sterility ( CM S) line s, a forward sub tracted cDNA lib rary wa s con structed u sing supp re ssion sub tractive hyb rid ization ( SSH ) . The cDNA of p epp er CM S line 23A and 12 1A were u sed a s driver and nearisogen ic re storer line 23C and 12 1C a s te ster. Gene s differen tially exp re ssed were screened u sing dot b lot hyb ridization. A total of 175 non redundan t exp re ssed sequence tags ( ESTs) were iden tified. The gene spoten tial function analysis showed that 103 of the se gene s were homo logou s to known gene s, and 55 cou ld be new gene s. The ESTs were sorted in to 14 functional categorie s according