同位素与生物素标记的HCMVDNA探针检测婴儿-VirologicaSinica.PDF

维普资讯 vo] 6 No．1 第6卷第 1期 病 毒 学 杂 惠 ． 1991年 3月 VIROLOGICA SINICA M 4r．1991 同位素与生物素标记的HCMVDNA探针检测 婴儿肝炎综合症血和尿标本的比较 洪世雯 余明炎 刘 洪 刘觉辉 (中国人民解放军302医院．北京1oo039) 摄 耍 用 。。P和生物素标记 的克隆化的人 巨细胞病毒 (HCMV)AD169株 DNA片段作探针． 采用 DNA-DNA斑点杂交法 ，对照捡侧 了27倒婴儿肝炎缩台症患者 (血清学检 测为 非 甲 非 乙型肝炎者 )临床血、尿标本的 HCMV—DNA。其 中l6份血标本呈 阳性 ，占59帅； 9份 尿标本呈阳性 ，占33帅。 初步 结果表 明， 血标本中 HCMV DNA检出率比尿标本捡出率 高26晡。标记的 P探针可检 测10pg同源DNA，生物素探 针可检测 50pg同源DNA，均不 与其它疱疹病毒及未感染的人胚肺细胞DNA杂交。将其 中26份血标本的 HCMV DNA杂 交结果与抗 HCMV IgM ELISA检 测结果相比较 ，符台率为 65晡。 关键诃 ：人巨细胞病毒 。。P标记探针 生物素标记探针 DNA-DNA杂交 抗 HCMV IgM 在很多婴儿肝炎综合症患者的临床标本中可检测出人巨细胞病毒 (HCMV)感染。 通常采用组织培养法分离病毒，但其操作繁琐，且需数周才能出结果。血请学方法也有 一 定的局限性。近年来所发展的核酸杂交试验是检测临床标本 中病毒核酸的一种敏感、 特异且快速的方法。HCMV核酸 内切酶片段的克隆，为核酸杂交试验制备探针所需的核 酸提供了可靠的来源。我们用 P和生物素标记的克隆化 AD169株DNA EcoRID片段 作探针，采用DNA—DNA斑点杂交法，比较了婴儿肝炎综合症患者血、尿标本中HCMV DNA的检出率。同时，也将血标本中HCMV DNA杂交结果与抗HCMV IgM ELISA结 果作了比较。现将初步结果介绍如下。 材 料 和 方 法 1． 病毒和蛔奠： HCMV AD 169株、单纯 疱疹 病 毒 2型 (HSV-2)及Epstein—Barr病毒 (EBV)B95-8株均由中国预防医学科学院病毒所引^。单纯疱疹病毒 l型 (HSV-1)由本实验 室分离。HCMV在人胚肺 (HEL)细胞 中繁殖。 2． 临床标本 的来源最处理 ：同一婴儿肝炎综台症患者 (1岁以下婴儿 ， 肝脾肿 大 ，肝 功 异 常，黄痘t血请学检测排除 甲乙型肝炎者 )，采集其血、尿标本各一份。由中国人民解放军302~i 院五科提供 。 (1)尿样 处理 ：2—20m1新鲑屎液于 2000xg离心5分钟后，上请于4℃，200O0Xg离心 2．5 本文于199睥 5月24日收到．8月6日修固。 维普资讯 病 毒 学 杂 志 第6卷 小时。沉淀溶于2∞ l含有 0．5和sDs和5∞ g／m prozt~sc的StE(Oolmol／l,NIC1．1Ommo1]I, lrls．t／C1pII8 0，lOrnraol／L EDTA)，置37*(2保温1小 时 ll1。此混合液用酚、酚一氯仿一异成酵 ． 50：48：2)和氯仿一异成醇 (Z4：1)各提取 一次后， 乙醇沉淀。加2011#1rE(1llmmol／,／Tris·IIC1 ptI7． 5，lmtool／LEDNA)溶解 沉淀。 (2)血样处理：将 2— 5ml肝 素抗凝血轻轻加于