口腔咽拭子基因组NA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书.doc

◆ TRIpure Reagent 抽提指南 ◆ ◆ 使用手册◆ 实验室使用，仅用于体外◆ TRIpure Reagent 抽提指南 ◆ ◆ 使用手册◆ 实验室使用，仅用于体外◆ TRIpure Reagent 抽提指南 ◆ ◆ 使用手册◆ 实验室使用，仅用于体外基因组DNA快速提取试剂盒 目录号：D目录编号 包装单位 D01 50次 适用范围： 适合于从中分离纯化基因组DNA。试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成 保存 50次 室温 ml 结合液B 室温 ml 抑制物去除液IR 室温 25 ml 漂洗液W室温 1ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇 Carrier -20℃ 200μl 洗脱缓冲液EB 室温 1 ml 蛋白酶K粉（可选） 20mg/ml -20℃ 20 mg 吸附柱A和收集管 室温 50套 本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果 储存事项： 结合液B或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。 为避免降低活性，方便运输，提供蛋白酶K为冻干粉状，收到后，可短暂离心后，加入1毫升灭菌水溶解。因为反复冻融可能会降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量分装冻存，－20℃保存。避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。产品介绍： 本试剂盒采用特制的进口DNA吸附柱和独特的缓冲液系统，特别适合于从中分离纯化基因组DNA。裂解消化处理后DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜（特别配备了Carrier可以从体系中轻松捕获微量核酸），再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净的基因组DNA从硅基质膜上洗脱。纯化后的DNA无杂质和PCR抑制剂，可直接适用于PCR分析。μg-3.5μg/拭子。 产品特点： 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 节省时间，简捷，单个样品操作一般可在20分钟内完成。 配备了Carrier 用于充分收集特别微量DNA。 多次柱漂洗确保高纯度，提取的DNA 纯度高，质量稳定可靠，可适用于各种常规操作，包括PCR、酶切、测序、Southern 杂交等。注意事项： 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。 开始实验前将需要的水浴先预热到用。 合液CB 和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。Carrier：Carrier 使用方法：Carrier，如果预期有较大量DNA产量，用户可以根据需要选择是否加入PolyCarrier。使用时在每个样品提取所需μl结合液B 中加入4μl Poly Carrier，将结合液B 与Carrier溶液充分颠倒混匀。Carrier混匀备用。混合液在室温24小时内稳定。 操作步骤：（实验前请先阅读注意事项） 提示：第一次使用前请先在15ml漂洗液WB中加入60ml无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!μl裂解液ML。 再加入0μl的蛋白酶K56℃放置。。加入μl结合液CB，立刻涡旋振荡充分混匀，70℃放置。μg, 可以在400μl结合液B 中加入4μl Poly Carrier 。冷却后加00μl 无水乙醇，。℃,乙醇需要冰上预冷后再加入。加入500μl抑制物去除液IR，12,000rpm 离心30秒，弃废液。 加入00μl漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。 加入500μl漂洗液WB，12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。 将吸附柱AC放回空收集管中，13,000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。 取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加μl洗脱缓冲液EB （洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中预热）， 室温放置分钟，12,000rpm 离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置分钟，12,000rpm离心1分钟。 洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积不应少于0μl，体积过小降低DNA洗脱效率，减少DNA产量。 DNA可以存放在2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在－20℃。问题与解决方法 问题 评论与建议 DNA产量低* Poly Carrier没有加入到结合液CB-建议：。 *-建议：。*样