小鼠Th1细胞特性转录因子T_bet基因腺相关病毒载体的构建.pdf

南京医科大学学报 自然科学版 ( ) 第 卷第 期 26 3 · · ( ) 184 ACTAUNIVERSITATISMEDICINALISNANJINGNaturalScience 年 月 2006 3 小鼠Th1细胞特异性转录因子T-bet基因腺相关病毒载体的构建 1* 1 1 2 1 1 1 1 1 王锁英 许化溪 王胜军 黄新祥 王文斌 陈巧林 马 斌 眭 建 姜旭淦 胡嘉波 , , , , , , , , , 江苏大学附属医院儿科 江苏 镇江 1江苏大学检验医学研究所 江苏 镇江 2江苏大学生命科学院 江苏 ( , 212001; , 212001; , 镇江 ) 212013 摘 要 目的 构建小鼠 细胞特异性转录因子 基因的腺相关病毒载体 方法 利用 方法 从 小鼠脾 [ ] : Th1 T-bet 。 : RT-PCR , Balb/C 细胞的 中扩增 基因全长 经测序证实后插入 质粒 用磷酸钙沉淀法 与 及 质粒共 mRNA T-bet cDNA, Pzac2.1 , , pAddeltaF6 p5E18 转染 细胞 包装成重组的病毒颗粒 并通过抽提病毒 进行 扩增鉴定重组病毒的形成 设立 基因为对照 结 293 , , DNA PCR , eGFP 。 果 的小鼠 基因被成功克隆 分析表明 与 中发表的序列相比具有 的同源性 重组质粒 : , , 。 1592bp T-bet Genbank 99.8% Pzac2.1-T- 的 及酶切鉴定表明 基因被定向插入 与 及 质粒共转染 细胞包装成病毒后 经荧光显微镜 bet PCR T-bet , pAddeltaF6 p5E18 293 , 和病毒 的 检测 证实已完成对重组病毒的包装 结论 成功构建了小鼠 基因的腺相关病毒载体 为 , 。 : , DNA PCR