7微生物生理(生长).ppt

第二节 微生物的生长;一、微生物生长的测量;1、血球计数板法;适用范围：个体较大细胞或颗粒，如血球、酵母菌等。不适用于细菌等个体较小的细胞。 原因：（1）细菌细胞太小，不易沉降；（2）在油镜下看不清网格线，超出油镜工作距离。 特点：快速，准确，直观，在菌悬液中加入少量美蓝可以区分死活细胞。;2、比浊法;3、coulter计数器;4、膜过滤法;5、平板计数法;技术要求：样品充分混匀，操作熟练快速（15~20min完成操作），严格无菌操作； 注意事项：每一支吸管只能用于一个稀释度，样品混匀处理，倾注平板时的培养基温度； 适用范围：中温、好氧和兼性厌氧、能在营养琼脂上生长的微生物； 误差：多次稀释造成的误差是主要来源，其次还有由于样品内菌体分布不均匀、以及不当操作。;6、薄膜过滤计数法;首先将待分离的样品进行连续稀释，目的是得到高度稀释的效果，使一支试管中分配不到一个微生物。如果经过稀释后的大多数试管中没有微生物生长，那么有微生物生长的试管得到的培养物可能就是由一个微生物个体繁殖而来的纯培养物。 将最终的稀释液用作接种物接种于一批试管中培养，部分试管因细菌繁殖而浑浊，另一些无细菌生长而澄清。据有无细菌生长的试管数目，查MPN（most probable number,最大可能数）表，可估算出样品的含菌量。;常用于食品和水的卫生检测中，也常用于因细菌数过低不宜采用稀释培养法的场合。;8、称量法;9、含氮测定法;10、DNA测定法;二、微生物群体生长规律;2、微生物的群体生长;★代时能够反应细菌的生长速率，代时短，生长速率快，代时长，生长速率慢。在很多微生物学研究中常常要了解微生物的代时。 ★代时在不同种微生物中的变化很大，多数微生物的代时为1~3h,然而有些快速生长的微生物的代时还不到10min,而另一些微生物的代时却可长达几小时或几天；另外，同一种微生物，在不同的生长条件下其代时的长短也不同；但是，在一定条件下，每一种微生物的代时是恒定的，因此它是微生物菌种的一个重要特征。;（2）无分支单细胞微生物的群体生长曲线;其它名称：停滞期、调整期、适应期 a.现象：活菌数没增加，曲线平行于横轴。 b.特点： 生长速率常数R= 0 细胞形态变大或增长 细胞内RNA特别是rRNA含量增高，原生质嗜碱性增强 合成代谢活跃（核糖体、酶类、ATP合成加快），易产生诱导酶 对外界不良条件敏感，（如氯化钠浓度、温度、抗生素等化学药物） c.原因：适应新的环境条件，合成新的酶，积累必要的中间产物;◆菌种 ： 繁殖速度较快的菌种的延迟期一般较短； ◆接种物菌龄 ： 用对数生长期的菌种接种时，其延迟期较短，甚至检查不到延迟期； ◆接种量：一般来说， 接种量增大可缩短甚至消除延迟期（发酵工业上一般采用1/10的接种量）； ◆培养基成分： 在营养成分丰富的天然培养基上生长的延滞期比在合成培养基上生长时短；接种后培养基成分有较大变化时，会使延滞期加长，所以发酵工业上尽量使发酵培养基的成分与种子培养基接近。;认识延迟期的特点对实践的指导意义：;②.对数期（logarithmic phase）;①由于此时期的菌种比较健壮，增殖噬菌体的最适菌龄，生产上用作接种的最佳菌龄； ②发酵工业上尽量延长该期，以达到较高的菌体密度； ③食品工业上尽量使有害微生物不能进入此期； ④是生理代谢及遗传研究或进行染色、形态观察等的良好材料。;③.稳定期（stationary phase）;发酵生产形成的重要时期（抗生素、氨基酸等），生产上应尽量延长此期，提高产量，措施如下：补充营养物质（补料）、调pH、调整温度 稳定期细胞数目及产物积累达到最高;④.衰亡期（decline phase）;(3)丝状微生物的群体生长特征及曲线;a.生长停滞期: 造成生长停滞的原因一是孢子萌发前真正的停滞状态，另一种是生长已经开始，但还无法测定。 b.迅速生长期:菌丝体干重迅速增加，其立方根与时间呈直线关系，菌丝干重不以几何级数增加，没有对数生长期。生长主要表现在菌丝尖端的伸长和出现分支、断裂等，此时期的菌体呼吸强度达到高峰，有的开始积累代谢产物。 c.衰退期:菌丝体干重下降，到一定时期不再变化。大多数次级代谢产物在此期合成，大多数细胞都出现大的空泡。有些菌丝体还会发生自溶菌丝体，这与菌种和培养条件有关。 ;原理：当微生物在单批培养方式下生长达到对数期后期时，一方面以一定的速度流进新鲜培养基并搅拌，另一方面以溢流方式流出培养液，使培养物达到动态平衡，其中的微生物就能长期保持对数期的平衡生长状态和稳定的生长速率。;连续 培养器;概念：通过调节培养基流速，使培养液浊度保持恒定的连续培养方法。 原理：通过调节新鲜培养基流入的速度和培养物流出的速度来维持菌浓度不变,即浊度不变。主要采用恒浊器，当浊度高时，使新鲜培养基