Survivin及其异构体Survivin-2B在膀胱癌中表达及意义.doc

Survivin及其异构体Survivin-2B在膀胱癌中表达及意义 　【摘要】 目的 分析Survivin及其异构体Survivin-2B在膀胱癌组织中的表达，并探讨其潜在的临床意义。方法 用实时定量RT-PCR法检测56例膀胱癌患者的肿瘤组织（试验组）和12例膀胱非恶性肿瘤组织（对照组）中Survivin mRNA，Survivin-2B mRNA的表达情况。结果 对照组中有4例微量表达Survivin，12例均微量表达Survivin-2B；56例膀胱癌标本全部表达survivin和Survivin-2B。Survivin的表达量与膀胱癌的病理分级和浸润深度呈正相关（0.5 【关键词】 膀胱癌 Survivin；Survivin-2B 异构体 实时定量RT-PCR Expression and clinical significance on survivin and its isomer survivin-2B in bladder cancer ［Abstract］ Objective To investigate the expression of survivin mRNA and its isomer survivin-2B mRNA in bladder cancer and discuss its potential clinical significance.Methods Real-time quantitive RT-PCR was used to detect the expression of survivin mRNA，survivin-2B mRNA in 56 cases of bladder malignant tumor tissues and 12 cases of bladder nonmalignant tumor tissues.Results Microcrystalline expressions of survivin and survivin-2B were detected in 4 and 12 nonmalignant tumor tissues respectively.Survivin and survivin-2B expressions were detected in all malignant tumor tissues.Expression of survivin was correlated well with pathological grade and infiltration depth（0.5 ［Key words］ bladder cancer；survivin；survivin-2B;isomer;real-time quantitive RT-PCR Survivin是凋亡抑制蛋白家族IAPs（inhibitor of apoptosis proteins）中结构最简单，抗凋亡作用最强的蛋白分子，含有四个外显子和三个内含子，只含有一个杆状病毒IAP重复序列（baculoviral IAP repeats，BIRs），BIR结构主要起抗凋亡作用。Mahotka等在1999年鉴定出Survivin的一种异构体Survivin-2B，Survivin-2B添加了被隐含外显子2B编码的23个氨基酸，该外显子插入到Survivin的BIR区（外显子2和3之间）改变其三级结构及抗凋亡活性，在转染实验中发现Survivin-2B有明显降低抗凋亡的特性，并具有细胞 毒性［1，2］。本研究通过运用实时定量PCR法检测膀胱癌组织中Survivin mRNA及Survivin-2B mRNA的表达，并做定量分析，探讨它们在膀胱肿瘤发生、发展中的作用及临床意义。 1 对象与方法 1.1 研究对象 选取2006年6月～2007年9月手术切除的原发性膀胱癌患者新鲜标本56例，男36例，女20例，年龄46～82岁，平均64岁。取同期膀胱非恶性肿瘤患者的膀胱病变组织标本12例（慢性膀胱炎6例，腺性膀胱炎3例，内翻乳头状瘤3例）作为对照。标本均具有完整的病理资料。按WHO病理分级标准：Ⅰ级17例，Ⅱ级28例，Ⅲ级11例；浸润深度：未侵及肌层39例，侵及肌层17例。 1.2 RNA提取及逆转录反应 将标本剪至0.2 cm3左右大小，无菌生理盐水冲洗3次，吹打成匀浆，加Trizol试剂1 ml，一步法抽提RNA。逆转录反应共40 μl体系，包括六随机引物2 μl（上海生工公司），RNA 4 μl，DEPC水9 μl（BBI公司），5×Buffer 8 μl，MMLV 1.5 μl，Rnasin 0.5 μl（Promega公司），dNTP 0.5 μl，H2O