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HIV新发感染的实验室检测方法进展-第三军医大学学报.doc
HIV新发感染的实验室检测方法进展
韩梅1,2 李涛3 张波1
(1. 第三军医大学西南医院检验科 重庆400038;2.重庆市疾病预防控制中心, 重庆400042;3.重庆市北碚区疾病预防控制中心,重庆400700)
摘要:艾滋病的发病率监测一直以来困扰着众多流行病学家。传统的非实验室方法存在各种局限。以检测HIV感染者样本中的标志物为手段以区分HIV新发感染/既往感染的实验室发病率监测方法近年来发展迅速。本文主要对近年来广受关注且具有较好应用前景的几种新发感染实验室检测方法进行综述。
【关键词】 HIV 新发感染 发病率 实验室检测方法
人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus, HIV)是艾滋病的病原体。其发病率,即人群中某个时间点新发生的HIV感染事件的数量,是衡量HIV流行程度的最重要参数,用以描述艾滋病的流行特征,如识别高危人群、评估干预效果。2012年在美国华盛顿召开的第19届世界艾滋病大会强调实现三零愿景——零新发感染、零歧视以及零死亡,HIV新发感染(Recent HIV infection, RHI)监测将被用来评估此项决议实施的进程及效果。
但HIV感染没有典型的早期症状,因而难以确定感染时间,所以艾滋病发病率一直困扰着众多流行病学家。传统的发病率计算方法通常复杂、昂贵、不够精确,比如通过在HIV阴性人群中开展前瞻性的队列研究,所获得的发病率不具有广泛的人群代表性,且由于干预措施影响到研究对象的行为改变,因而不可避免地影响到监测结果。另外,使用数学模型评估HIV流行率、预测艾滋病病例数和死亡率有一定的作用,但通常由于很难获得模型所需要的一系列参数,因而评估的结果也缺乏精确性。
鉴于上述方法的局限性,人们开始关注通过实验室检测HIV感染者样本中的标志物来区分是否新近感染,进而计算发病率的方法。本文主要对近年HIV新发感染实验室检测方法的进展进行综述。
免疫标志物作为HIV感染时间标志的血清学方法(serologic testing algorithms STARHS)
Janssen等人[1]于1998年报道了一种新型的用于新近感染检测的血清学方法,即STARHS,
作者简介:韩梅(1976-),女,重庆市人,副主任技师,博士在读,主要从事艾滋病的实验室诊断。
通讯作者:张波,Email: ivo6@
这是一类基于酶联免疫反应原理的实验。抗体形成的不同阶段其数量、比例、亲和力、同种异构体(isotype)或者说特异性等属性都存在差异,籍此可以精确地从HIV阳性样本中检测出近期感染者,当“近期”被定义为一个准确的时间段后,HIV发病率便可以借助一次横断面调查而精确计算出来。遗憾的是,这类方法最初因为在不同HIV亚型之间差异明显,影响了其在全球范围的推广应用。此外,因为该类方法主要用于监测和研究,在当时缺乏市场和商业前景,因而一度发展受挫。
1.1基于HIV特异性抗体定量检测的BED-捕获酶联试验
为了解决STARHS方法检测HIV亚型时出现的差异问题,美国疾病预防控制中心在20世纪90年代初建立了一种BED-捕获酶联试验(BED-capture EIA,BED-CEIA)。该实验通过检测HIV感染者体内HIV特异性IgG占HIV总抗体的比例来区分是否为近期感染。因为方法设计过程中采用了由HIV-1三种亚型B、E、D衍生所得的gp41片段,在实验中加入这种片段(肽),就可与酶联板上包被的羊抗人IgG抗体结合,而该抗体可以识别来自广泛范围的HIV-1亚型的gp41片段,因此该方法称为“BED-捕获酶联实验”。HIV感染者在血清阳转后,其体内的HIV特异性IgG抗体与总IgG抗体的比例随HIV感染时间的增加而增高,从感染者的抗体检测呈阳性开始到BED-CEIA的光密度值(OD-n)达到一个设定的临界值(用来区分HIV长期感染与新近感染)为止的这段时间,为STARHS的窗口期。不同的HIV亚型有不同的窗口期,必威体育精装版的研究结果提示最佳窗口期为155天,其对应的临界值(Cutoff CO)为0.8,检测方法的敏感性和特异性分别达到76.82%和93.48% [2] 。
BED试验发展至今,已经有商品化的试剂,价格低廉,操作简便,性能稳定。但使用一段时间后,人们发现BED实验会将一部分长期感染者错判为近期感染者,导致对HIV发病率的高估[3]、[4]。因此,WHO在2005年曾建议该方法不能用于常规监测[5] 。此后研究表明,导致错分的原因与病人体内抗体水平下降有关。导致抗体水平下降的原因有接受高效抗逆转录病毒治疗,感染者疾病进展,天然的低抗体水平以及免疫反应变异性等。因此,错分率作为校正因子被引入BED发病率计算公式中[24]。然而BED-CE
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