BioRad荧光定量PCRiQ5说明书.pdf

1. iQ™5 多重实时荧光定量PCR 仪简介 在现代分子生物学的发展过程中，核酸放大技术的出现及与之相关的检测技 术的成熟起到了至关重要的作用，而实时荧光定量PCR 技术可以说是两者完美 的结晶。它通过加入能与DNA 结合的荧光染料或在引物/探针上标记荧光基团等 方法，在 PCR 过程中，随着产物的量不断增加，荧光信号也随之发生相关性的 变化，再通过数学处理，算出原始靶DNA 的含量。 实时荧光定量PCR 技术可以在较大的动力学范围内实现精确定量，其灵敏 度也达到相当高的程度。随着这项技术的发展，其专用的实时荧光定量 PCR 仪 也应运而生。我们伯乐公司这次推出的 iQ™5 多重实时荧光定量 PCR 仪是在 iCycler 荧光定量PCR 仪的基础上强化而成，以求性能达到最优。 iQ™5 多重实时荧光定量PCR 仪所装配的光源（钨卤素灯）拥有更宽的光 谱范围，给予用户在其选择上最大限度的灵活性。经过优化的激发/ 发射透镜组 可以显著提高多重PCR 的灵敏度，减少多重荧光之间的干扰。它的CCD 检测器 可以同时监测96 个反应孔的荧光数据。在热循环过程中，当前完整的实验数据 会被软件实时地以图解的形式表现出来。 实时的数据显示可以大大提高反应孔与孔之间数据比较的可靠性，iQ™5 多 重实时荧光定量 PCR 仪则可以方便地实现数据实时显示，有利于及时反馈试验 状况。以上介绍的各项特性保证了iQ™5 多重实时荧光定量PCR 仪在使用过程 中具有更强的可靠性和灵活性。 iQ™5 多重实时荧光定量PCR 仪所配备的运行、分析软件设计得十分人性 化，且功能强大。其功能模块的界面模式可使用户可以快速地完成各种操作。当 用户把光标放在软件的功能键上时，其下方还会出现相应说明文字。此外，按键 盘的―F1‖键还可以启动在线帮助指南。当用户设定完结果分析参数后，点一键即 可得到最终分析结果。 1 2. iQ™5 使用快速指南 2.1 如何用iQ™5 运行一次实验 2.1.1 综述 1. 创建、选择或修改一个反应程序文件（Protocol file ） 2. 创建、选择或修改一个反应板设置文件（Plate Setup file ）。 3. 点击―Run‖键。 4. 以选定的反应板设置文件和反应程序文件进行反应。 2.1.2 反应程序文件（Protocol file ）设置指南 用户可以在Workshop 模块中，创建一个新的反应程序文件，或是直接选择或修 改一个已有的反应程序文件。 选择一个已有的反应程序文件 1. 点击―Protocol‖键，在弹出的浏览器中选定所要选择的反应程序文件的路径。 2 2. 点击所需的反应程序文件的文件名，此时该文件的具体设置在―Selected Protocol‖窗口中显示出来。 注意：iQ™5 软件安装后，里面会自带一些我们设置好的反应程序文件作为示例， 用户可以直接调用它们。 创建或修改一个反应程序文件 在―Selected Protocol‖窗口点击―Edit‖键即可对当前的反应程序文件进行修改； 在―Selected Protocol‖窗口点击―Create New‖键即可创建一个新的反应程序文件。 无论点击―Edit‖或―Create New‖键，软件都会自动切入―Protocol Edit‖窗口。 这个窗口下部有一显示反应内容的表格，用户可以在其中按自己的需求进行修 改。 1. 修改保温时间和保温温度。 ―Dwell Time‖列设置保温时间，―Setpoint‖列设置保温温度。如果用户要设置一个 3 10 秒的保温时间，那就要在相应格中输入0 ：10 或者0.10 。 2. 选择荧光数据收集步骤 ―Data Acquisition‖列用于设置荧光数据收集步骤。其中―Real- Time‖选项用于荧光 定量，―Melt Curve‖用于熔点曲线分析。 注意：如要进行