利用原生质体融合技术选育高产菌株-河北师范大学学报.PDF

第 3 1 卷/ 第 1 期/ 河北师范大学学报/ 自然科学版/ Vol . 3 1 No . 1 2007 年 1 月 J OURNAL OF HEBEI NORMAL UNIVERSITY/ Natural Science Edition/ J an. 2007 利用原生质体融合技术选育高产菌株 李小俊 , 　孙海虹 , 　赵宝华 , 　边艳青 (河北师范大学 生命科学学院 ,河北 石家庄 　0500 16) ( ) # # 摘 要 : 以龟裂链霉菌 S terp omy ces ri m os us 98 和 76 为出发菌株 ,分别用溶菌酶制得 2 个亲本的原生质体 , 其中 76 # 采用 15 W 紫外灯下 30 cm 照射 25 min ,100 %灭活 ,用 PE G 诱导进行了原生质体的融合. 通过比较菌落外 观 、颜色挑选融合子 328 株 ,结合前期代谢情况进一步筛选高单位的融合菌株 8 株 ,经反复传代考察融合子的稳定 性后得到 1 株新菌株 102 # ,其发酵单位比亲本提高了 13 . 0 %. 关键词 :原生质体融合 ; 灭活 ; 筛选 中图分类号 :Q 939 . 97 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 (2007) 0 10 11204 ( ) 土霉素 terramycin 是属于四环类的一种广谱抗生素 , 以其抗菌谱广 、抑菌效果好 、毒副作用小 、饲料利 用率高等优点 ,在医疗 、畜牧业和农业上有广泛的用途和广阔的市场前景. 近年来 , 随着菌种选育及工艺优 化 ,发酵单位有了很大的提高 ,使一些厂家的平均发酵单位能够维持在 34 000 U/ mL 左右[ 1 ] . 但由于诱变育 种出现饱和现象 ,所选育的菌株到发酵罐后生长代谢慢或发酵单位低限制了常规育种的效果. 原生质体融合 技术使遗传物质的传递更为完整 ,可以获得性状优 良的重组体. 笔者研究室用常规育种方法选育出 98# 菌 种 ,该菌种具有前期氨氮代谢快 、实验罐通氨时间早 、前期发酵单位高 、后期发酵单位停滞的特点;保留菌种 76 # 的特点是前期代谢慢但后期发酵单位高. 利用原生质体融合技术将二者遗传物质重组 ,得到兼有二者特 性的融合新菌种 102 # ,其前期氨氮代谢比98 # 提高了 10 . 0 % 、发酵单位比76 # 提高了 13 . 0 %. 经传 6 代考 察 ,102 # 菌种稳定性强. 1 　材料和方法 1. 1 　材 　料 1. 1. 1 　菌 　种 ( ) # # 龟裂链霉菌 S terp omy ces ri m os us 76 和 98 ,笔者实验室保存菌株. 1. 1. 2 　实验用培养基 斜面培养基 :麸皮 ,琼脂. ( ) 母瓶培养基 :淀粉 30 g ,黄豆饼粉 3 g ,CaCO 5 g , N H SO 4 g ,N aCl 5 g ,玉米浆 4 g , KH PO 0 . 15 g ,水 3 4 2 4 2 4 1 L . ( ) 发酵培养基 :淀粉 150 g ,黄豆饼粉 20 g ,CaCO 14 g , N H