摘要1957年Burnet提出了cell系选择学说解释了抗体产生机制其实.DOC

摘要 1957年Burnet提出了cell系选择学说，解释了抗体产生机制，其实不论免疫原有多纯其刺激机体所产生的抗体都是非特异性得多抗，而到了1975年8月7日，由英国剑桥大学的Kohler和Milstein发表的“分泌预定特异抗体的融合细胞的持续培养”这一著名论文，从而创立了一项具有化时代意义的新技术--利用B淋巴细胞杂交瘤产生单抗；这是基于20世纪60年代建立的细胞杂交瘤技术发展起来的，杂交瘤细胞具有双亲细胞的染色体，因而可表现出双亲细胞所具有的全部或部分特性--既具有肿瘤细胞无限增值的能力，也具有淋巴细胞的一些特性，如分泌抗体等。用预定抗原免疫的小鼠脾细胞与体外培养中能无限增殖的骨髓瘤细胞融合，可形成B细胞杂交瘤。这种杂交瘤细胞具有亲本细胞的特征，既能像骨髓瘤细胞一样在体外培养中无限地快速增殖且永生不死，又能像B淋巴细胞那样合成和分泌特异性抗体。通过克隆化可获得由单个细胞增殖而来的单克隆杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株所产生的抗体是针对同一抗原表位的高度同质的抗体，即所谓单克隆抗体（Monoclonal Antibody，McAb），简称单抗。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为疾病的诊断、治疗和预防提供了新的工具。制备单抗的抗原依据使用目的的不同可简单的分为免疫原，检测原和鉴定原。免疫原从纯度上说虽不要求很高，但高纯度的抗原使得获得所需单抗的机会增加，同时可以减轻筛选的工作量。因此，原则上免疫原是越纯越好，一般可根据所研究的抗原和实验室的条件来决定。免疫原一般只需初步提纯甚至不提纯，但抗原中成分复杂，特别是如果这些混杂物的免疫原性较强时，则必须对抗原进行纯化。检测原可以与免疫抗原纯度相同，也可以是不同的纯度，这主要取决于所用筛检方法的种类及其特异性和敏感性。鉴定原是对单克隆抗体的特异性、亲和力以及结合特性、理化特性等各种技术指标做最后确认的抗原，一般要求尽可能的纯，并保持较好的抗原活性。由于用途的不同，对鉴定原的纯化或制备方法以及来源常有特殊要求。 ??? 一般而言，抗原的纯度不很重要，特别是免疫原性较强的抗原。而能否成功得到所需要的单克隆抗体的真正关键是免疫程序、免疫剂量和方法。A 免疫用抗原：一般50ug/每只小鼠×5只=250ug/1个分装管，备做首次免疫用。另分装2个100ug/1管，备做融合前加强免疫用，再分装25ug/只/×5=125ug/1个分装管，共分装4-5管，备加强免疫用。B 检测用抗原：100ug/每管，分装共3管。C 分装好的抗原除马上免疫用管外，其余均装入小塑料袋中，写好抗原名标签，马上存入-700C。剩余抗原交保管员存-700C，并填好交接班表格。选择合适的免疫方案对于细胞融合的成功并获得高质量的McAb至关重要。免疫方案一般在融合前两个月左右确立，并开始初次免疫。免疫方案应根据抗原的特性及来源的不同而定。抗原的种类繁多，包括天然的蛋白质抗原和颗粒性的细胞抗原（如细胞，细菌等）、基因重组蛋白，合成性抗原（如多肽）以及小分子半抗原等。不同的抗原免疫动物具有不同的特殊性。一般完全抗原（如天然蛋白质和基因重组蛋白），尤其是可溶性抗原，为得到高效价的抗血清，免疫动物时常需加用佐剂；合成性抗原（如多肽和小分子半抗原）等半抗原物质必需先通过人工的方法与蛋白质载体偶联成为完全抗原后，再与佐剂混合免疫动物。使用佐剂后可增加抗原的免疫原性和延长抗原在机体内存留的时间，从而改善抗原原有的免疫原性，但佐剂并不能使无抗原特性的分子具有抗原性。 就抗体制备而言，天然抗原最好。运用蛋白质等生物大分子分离纯化技术直接从生物标本中分离纯化蛋白分子用作抗原用于实验动物接种的免疫原有可溶性抗原和颗粒性抗原。颗粒性抗原免疫性较强，不加佐剂也可获得很好的免疫效果。如抗原来源方便，还可以增加免疫次数，缩短间隔时间，以提高免疫效果。可溶性抗原免疫原性较弱，一般要添加佐剂以增强抗原的免疫原性和延长抗原在动物体内的存留时间。常用的佐剂有福氏完全佐剂和福氏不完全佐剂。此外，用于可溶性抗原，特别是一些弱抗原的免疫方案也不断更新，如①将可溶性抗原颗粒化或固相化，一方面增强了抗原的免疫原性，另一方面可降低抗原的使用量。②改变抗原注入的途径，基础免疫可直接采用脾内注射。③使用细胞因子作为佐剂，提高机体的免疫应答水平，促进免疫细胞对抗原的反应性。 对于较纯的可溶性抗原，通常小鼠的首次抗原免疫剂量为50～100μg/次，大鼠为100～200μg/次，兔为100μg ～1000μg/次，合成免疫原为2 mg(半抗原约为20～200μg)。加强免疫的剂量通常为首次剂量的1/2，如需制备高特异性的抗体，可选用低剂量短程免疫法；反之，欲获得高效价的抗血清，宜采用大剂量抗原长程免疫法。 为取得较好的免疫效果，在初次免疫时，可溶性免疫原一般