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原生质体融合选育L亮氨酸高产菌的研究
维普资讯
第 27卷 第 l)【期 伍时华等 ：原生厦体融合选育 L 亮氨酸高产莆的 宄
原生质体融合选育 L．亮氨酸高产菌 的研究
伍 时些1 张 健 方 杰 刘积云 陈 宁 张克旭
1(广西工学院，柳州，545(106)
2(天津轻工业学院食 品工程 系，天津，30(1222)
摘 要 黄色短杆 菌 TQ5351(Met —IIe 十2TA 一SG )南 TQ5356 (Met +ne ～
AB+0一HI．)为 最转 ，哭 闱原 生质体 融奇技 末 定 旬选 育 一栋 L．亮氧 酸 高产 曹 TQ9806
(Met一+Ie【‘一2-TA SG 十 ．AB 口一HI) 访 菌 株 经 5I罐 分批 发 64h产 L．亮 氡 蓖
227g／1。
关键词 黄色短奸曹 厚 生质件 融合 L一亮氧酸
L一亮氨酸 (L leucine)是人体 与动物体 5．0。
的必需氨基酸之一。通过诱变方法选育 L (3)药物抗性筛选培养基 ：基本培养基 +
亮氨酸产生菌 的报道较 多n--4．，但 至今 尚未 Met10mg+Ie【10mg +2一噻 唑丙氨 酸 (2一
见到有应用原生质体融合选 育 L．亮氨酸高 TA)5．0或 —AB5．0或 0一羟 基亮氨 酸 (0一
产菌的研究报道 。作者 以黄色短杆菌 TQ53 HI)5．0；完全培养基 +磺胺胍 6．0。
为出发菌株，经硫酸二乙酯和紫外线 多次诱 (4)基础种子培养基 ：葡萄糖 25、玉米浆
变处理，已选育 出2株带有不同抗性标记的 20mI、尿 素 2(分 消)、KH2P(h 1．3、MgSO4
L亮氨酸产生菌 TQ5351和 TQ5356，在未 0．4、M nSO40．叭 、M et0．3、VB 300gg，VH
优化条件下，摇瓶发酵 72h分别产 L一亮氨酸 200 ／zg。
10．6g／I和 9．8g／I 本文将这 2株菌作为 (5)基础发酵培养基 ：葡萄糖 120、玉米
亲株进行原生质体融 台，选育 出一株具有双 浆 30mI (NH4)2s( 30、K PO41．0、
亲 株 全 部 抗 性 标记 的 L一亮 氨 酸 高 产 菌 MgS( 0．4、MnS()d0．Ol、Met0．5、lle0．06、
TQ9806。该菌株经 5I罐分批发酵 64h，产 VB3005tg、VH505tg、CaC(h2O(分消)。
j一亮氨酸 22．7 L。
(6)摄佳种子培养基 ：葡萄糖 30、玉米浆
l 材 料与方法 25mI、尿素 2(分 消)、KH2PO41．3、MgSO4
0．4、MnSO40．叭 、Met0．4、v_ 300 ／zg、VH
1．1 菌 种
200 ／zg。
黄色 短杆菌 (Brevibacterium Ⅱ “卅 )
TQ5351 (Met + Ile一 +2TA +SG )和 (7)最佳发酵培 养基 ：葡萄糖 130，玉米
TQ5356(Met一+Ile 十n—AB +Q-HI)：由 浆 40ml一 (NH )2SO4 20、NH4Ac 20、
作者通过诱变育种获得。 KH2PO41．0、M gSO40．4、MnSO 0．0l、FeS—
1．2 培养基cg／L) r140．叭 、M et0-5、lie0-06、Glu0 3、VB 300
(1)液体培养基 、固体完全培养基和再生 g，VH50gg、CaC(~
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