第3章 液相色谱分析.ppt

第三章高效液相色谱分析 3-1 高效液相色谱法 3-2 流程及主要部件 3-3 影响分离的因素 3-4 高效液相色谱法 的主要分离类型 （l）紫外检测器 （2）荧光检测器 （3）示差折光率检测器 （4）电导检测器 特点：灵敏度高，最小检测浓度达10-9 g/mL； 流通池体积小（容积 8-10μL）； 对流动相的流速和温度变化不敏感，可用于梯度洗脱 应用最广，对大部分有机化合物有响应 紫外普通检测器和光电二极管阵列检测器的比较 (2). 荧光检测器（fluorescence detector） (3). 示差折光检测器（differential refractive index detector） A─涡流扩散项 影响色谱峰扩展的因素的柱外因素：柱前展宽：由进样引起。若将试样直接注入到色谱柱顶端填料中心点，或注入到填料中心之内1-2mm处，可减小柱前展宽，提高柱效。柱后展宽：由接管，检测器流通池的死体积所引起。　 化学键合固定相类型 IEC是利用离子交换原理和液相色谱技术的结合来测定溶液中阳离子和阴离子的一种分离分析方法。 R—H+ + NaOH R—Na+ + H2O R—H+ + NaBr(待测物) R—Na+ + HBr 由反应可见：经抑制柱后，一方面将大量碱转变为电导很小的水，消除了流动相本底电导的影响。同时，又将样品阳离子Br-转变成相应的酸HBr，提高了检测灵敏度。 在分离柱后加一个抑制柱的离子色谱称为抑制型离子色谱或称双柱离子色谱。由于抑制柱要定期再生，而且谱带在通过抑制柱后会加宽，降低了分离度。后来，Frits等人提出采用电导率极低的流动相溶液，例如用1×10-4～5×10-4mol/L苯甲酸盐或邻苯二甲酸盐的稀溶液作流动相，称为非抑制型离子色谱或单柱离子色谱。 1．根据相对分子质量选择 相对分子质量十分低的样品，其挥发性好，适用于气相色谱。标准液相色谱类型（液一固、液一液、及离子交换色谱）最适合的相对分子质量范围是20O～2000。对于相对分子质量大于2000的样品，用排阻色谱法为最佳。 2．根据样品溶解度选择 弄清样品在水、异辛烷、苯、四氯化碳、异丙醇中的溶解度。如果样品可溶于水且能离解，采用离子交换色谱为佳；如样品可溶于烃类(如苯或异辛烷)，则可采用液一固吸附色谱；如样品溶解于四氯化碳，则多采用常规的分配和吸附色谱分离；如样品既溶于水又溶于异丙醇时，常用水和异丙醇的混合液作液一液分配色谱的流动相，以憎水性化合物作固定相。  表 3-3 液相色谱分离类型选择参考表 相对分子质量 溶于水——排阻色谱，水为流动相 ＞2000 不溶于水——排阻色谱，非水流动相 同系物——分配色谱 不溶于水 异构体——吸附色谱 样品 分子大小差异——排阻色谱 反相液一液色谱 相对分子质量 溶于水，不离解 ＜2000 排阻色谱，水为流动相 碱——阳离子交换色谱