第4章_液相色谱分析.ppt

* 例如：分析阳离子时，以无机酸为流动相，抑制柱为高容量的强碱性阴离子交换树脂，则发生下列反应： R+—OH + HCl(流动相)——R+—Cl- + H2O R+—OH + MCl(待测物) ——R+—Cl + M+OH- 可见，不仅大量酸转化为低电导的水，而且待测离子转化为具有更大淌度的碱。 离子色谱的原理: * 离子色谱的特点： 分析速度快：可在数分钟内完成一个试样的分析； 分离能力高：在适宜的条件下，可使常见的各种阴离子混合物分离； 分离混合阴离子（NO3—、NO2－、SO42－、PO43－等）惟一快速、灵敏、准确的最有效分析方法 。 缺点：抑制柱要定期再生、谱峰在经过抑制柱后会展宽，降低分离度。 * 四 、尺寸排阻色谱法 又称凝胶（渗透）色谱，主要用于大分子的分子分离。它是基于待测物分子的尺寸和形状不同来实现分离的。 1、分离原理：固定相为化学惰性的多孔凝胶，它类似于分子筛，但孔径更大。凝胶内有一定大小的空穴，分子体积大的待测物不能渗入孔穴中而被排阻，较早地被淋洗出来，中等的部分渗透，小分子则完全渗透，最后流出色谱柱。即待测物分子按分子大小（分子量大小）先后从柱中流出。 * 2. 固定相 3. 流动相的要求：能溶解样品且与凝胶相似（润湿凝胶）、粘度小（增加扩散速度）。 * 第四节 色谱分离方法的选择 一般可根据试样相对分子质量范围、溶解度及分子结构等进行分离方法的初步选择。 一、根据相对分子质量选择 二、根据溶解性选择 三、根据分子结构选择 * * 第五节 高效毛细管电泳简介 一、基本原理 1、概述 在电解质溶液中，位于电场中的带电离子在电场力的作用下，以不同的速度向其所带电荷相反的电极方向迁移的现象，称之为电泳。由于不同离子所带电荷及性质的不同，迁移速率不同可实现分离。 * 毛细管电泳是以高压电场为驱动力，以毛细管为分离通道，依据试样中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离、分析物质的一类液相技术，是经典电泳和现代微柱分离的结合。 * 2、电泳现象与电渗流现象 电泳现象：带电离子在电场作用下的迁移（定向移动），速度ν电泳 * 电渗流现象： 石英玻璃表面存在硅羟基，pH3时, 形成双电层，在高电场的作用下，双电层中的水合阳离子引起毛细管中的溶液整体向负极移动，速度ν电渗流 * 3、分离过程： * 4、分离类型 毛细管区带电泳（CZE）：最普遍、最基本的一种分离模式。 * 毛细管凝胶电泳（CGE）： 将聚丙烯酰胺在毛细管柱内交联生成凝胶。其具有多孔性，类似分子筛的作用，试样分子按大小分离。能够有效减小组分扩散，所得峰型尖锐，分离效率高。可分离测定蛋白质、DNA等。 * 毛细管胶束电动力学色谱（MECC）： 用来分离中性物质，扩展了高效毛细管电泳的应用范围。 * 二、仪器装置 * 电压：0～30KV。 分离柱不涂敷任何固定液； 紫外或激光诱导荧光检测器（10-19～10-21 mol/L） * 三、主要特点和应用 高分辨率：理论n高达数百万块，甚至数千万块； 高灵敏度：可检测出低至10-21 mol/L浓度的物质； 高分析速度：可在3分钟内分离30种阴离子；1.7分钟分离19种阳离子；4分钟可分离10种蛋白质； 试样用量少：仅需几nL（10-9 L）的试样； 仪器简单，操作成本低：分析一个试样仅需几毫升流动液。 * 不足之处： 进样不够方便。应用范围相对较窄。 分析阴离子时，由阴极进样，在阳极检测。但电渗流方向与阴离子受电场力作用移动方向相反，出峰时间较长。 * 第六节 纸层析和薄层层析法 一、纸层析和薄层层析分离过程 纸层析和薄层层析流动相的移动是依靠毛细作用。 * 二、操作技术 层析纸和层析板: 特制的色层滤纸。层析板是用专门的涂布器把浆状的吸附剂（硅胶或氧化铝，200～250目）均匀地涂在长条形玻璃板上（厚度0.15～0.5mm）。干燥后即可使用。 展开剂：由一种或多种溶剂按一定比例组成。 点样: 用微量注射器或玻璃毛细管吸取一定量试样点在原点上。 显色检测：常用的显色方法有喷洒显色剂、碘蒸气熏或氨水熏等。 * 三、特点及应用 平板色谱简单、方便、及操作费用低； 可以在一块层析板上同时展开多个试样及将多条滤纸同时展开； 采用方形薄层板还可以方便的进行二维展开，即按一般方法展开后，改变方向和展开剂再次展开，进一步改善分离效果； 试样一般不需要经过预处理即可分离。 * 缺点： 分离效率较低，不适用挥发性试样分离。定性定量不便。 应用：平板色谱法在染料、农药、医药、有机酸碱类化合物、糖类化合物