第7章 高效液相色谱分析法2.ppt

梯度淋洗装置 液-固吸附色谱 液-液分配色谱 化学键合固定相 化学键合固定相的特点 离子交换色谱 排阻色谱色谱 亲和色谱(AC) 流动相类别 流动相选择 HPLC的应用 2. 稠环芳烃的分析 * 第七章高效液相色谱法High Performance Liquid Chromatography（HPLC） 7.1 高效液相色谱法概述 7.2 高效液相色谱仪 7.3 主要分离类型与原理 7.4 高效液相色谱流动相 7.1 高效液相色谱法概述 7.1.1 高效液相色谱法与经典液相色谱法 固定相 流动相 色谱带 色谱住 二者 最大差异 固定相 颗粒大小 高压输液 柱效高 分析速度快 色谱柱：柱长10~25cm，内径2~10mm 色谱柱：柱长10~200cm，内径10~50mm 能在线检测 不能在线检测 色谱柱可重复多次使用 色谱柱只用一次 分析速度快：0.05~1.0h 分析速度慢：1~20h 柱效高：40000~60000块塔板/m 柱效低：20~50块塔板/m 填料颗粒小：2~50?m（2500~300目） 填料颗粒大：75~600?m（200~30目） 高压：40~50MPa 常压或减压 高效液相色谱 经典液相色谱 高效和经典液相色谱法比较 7.1.2 高效液相色谱法与气相色谱法 二者 最大差异 流动相 样品气化 柱温 分析对象 仪器制造难度较大 仪器制造难度较小 运行和操作较难，运行成本高 运行和操作容易，运行成本低 流动相为不同极性液体，与组分作用 流动相为惰性气体，与组分无作用 有灵敏度较高的通用检测器（ELSD） 有很灵敏的检测器（ECD）和较灵敏的通用检测器（FID,TCD) 色谱柱不能很长，柱效不会很高 用毛细管柱色谱可得到很高的柱效 可以用于热不稳定物质的分析 不能用于热不稳定物质的分析 几乎可以分析各种物质 只能分析挥发性物质（约20%的物质） 高效液相色谱 气相色谱 气相和高效液相色谱法比较 7.1.3 高效液相色谱分离理论 与气相色谱法相同 可忽略 7.2 高效液相色谱仪 7.2.1 高效液相色谱仪基本结构 储液器 进样器 色谱柱 检测器 数据处理系统 馏分 收集器 高压泵 高压输液系统 梯度洗脱装置 7.2.2 高压输液系统 作用：为色谱分离提供流速恒定的流动相。 组成：储液器、高压输液泵、过滤器、压力脉动阻力器。 要求：密封；流量恒定；压力平稳、可调；易于更换溶剂。 常用高压输液泵 恒压泵 恒流泵 脱气装置、梯度混合装置 外梯度: 利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。 内梯度: 一台高压泵, 通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。 7.2.3 进样系统 作用：定量引入样品。 要求：死体积小。 进样器：隔膜注射进样器；高压进样阀。 柱外展宽（柱外效应）小 六通阀进样过程示意图 7.2.4 分离系统——色谱柱 作用：实现样品组分的高效分离。 组成：柱管+固定相。 柱管材料：不锈钢、聚合材料。 柱管尺寸： 内径：4-5mm 长度：10-50cm 填料直径： 5-10?m 塔板数： 7 000 - 10 000 色谱柱填装好坏 是影响柱效的重要因素 7.2.5 检测系统 作用：将样品组分的量定量转化为电信号并放大、输出。 种类：紫外-可见检测器(UVD)； 要求：灵敏、噪音小、响应快、线性范围宽、死体积小 。 类型：溶质型检测器；总体型检测器 。 荧光检测器(FLD)； 折光检测器(RID) ； 蒸发光散射检测器(ELSD) 。 电化学检测器(ED)； 7.2.5 检测系统 紫外-可见检测器和光电二极管阵列检测器 可调波长紫外-可见检测器 应用最广的一类检测器 固定波长紫外-可见检测器 特点：灵敏度高；线形范围宽； 流通池小（1mm×10mm，容积 8μL）； 对流动相和温度变化不敏感。 可用于梯度洗脱 7.2.5 检测系统 光电二极管阵列检测器(DAD) 色谱检测的同时 可以得到样品组分的紫外-可见光谱 7.2.5 检测系统 荧光检测器 特点：灵敏度高；选择性好； 可用于梯度洗脱； 线性范围窄。 具有荧光的物质 应用范围小 对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应； 7.2.5 检测系统 （示差）折光检测器 偏转式、反射式 特点：通用； 灵敏度低； 对温度变化敏感； 不能用于梯度洗脱。 电化学检测器 四、其它检测器 蒸发光散射检测器 质谱检测器 通用型检测器 7.2.6 附属系统 脱气装置 梯度洗脱（淋洗）装置 恒温 自动进样器 馏分收集器 数据处理装