7巴氏小体.ppt

实验七 人类巴氏小体的快速检测 ;一、实验目的 了解巴氏小体的位置、形态、形成机理； 掌握巴氏小体的玻片制备方法。 ;二 、实验原理 1、巴氏小体（Barr body, sex-chromatin body, X-body） 1949年，神经生物学家巴尔在检测雌猫的神经细胞间期核时发现有一个深染的结构，之后在女性的许多组织间期细胞核中也发现这种深染的结构普遍存在，而男人体内没有发现。现在一般认为巴氏小体是存在于XY型性别决定的生物中，雌性动物的一条X染色体在间期异染色质化形成深染的结构。这个小体叫巴氏小体，又叫X小体，性染色质，这种小体与性别和X染色体的数量有关。 为什么会发生一条染色体的异固缩呢？;2、剂量补偿（Dosage complement effect） 在XY型性别决定的生物中，性连锁的基因表达在两性间有相同或相近的剂量遗传效应，也就是说，在雌雄动物的细胞中，由X染色体编码的酶或其它蛋白等基因产物在数量和质量上相等或相近。 剂量补偿效应的补偿方式： 哺乳动物 X染色体随机失活或父源X染色体失活 有袋动物 父源X染色体失活 黑腹果蝇 雄性个体X染色体基因表达水平加倍 秀丽线虫 雌性两条X染色体基因表达水平减半;如何解释剂量补偿效应呢？ ;4、萊昂假说证据 1）玳瑁猫的毛皮色即雌性三色猫，腹部白色，背部和头部散布黄色和黑色的斑块。 基因型为XBXb , B基因产生黑斑，b基因产生黄斑。XB和Xb随机失活，有活性的基因表现出相应的斑块，形成黑黄相间的斑块。如为雄性，其基因型为XXY。 2）毛色镶嵌小鼠，黑白斑毛色镶嵌雌性小鼠 基因型为XBXb , B基因产生黑斑，b基因产生白斑。XB和Xb随机失活，有活性的基因表现出相应的斑块，形成黑白相间的斑块。;毛色镶嵌小鼠的成因;3）人类的6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G-6PD）的测定 G-6PD基因位于X染色体，男女活性相同，表明女性有一条X染色体失活。 G-6PD电泳分出快型F和慢型S，由一对等位基因F和S编码。FF或SS型出现一条带，F/S型出现两条带。 用胰酶消化处理F/S型女人的皮肤组织，使其分成单个细胞，进行单克隆培养，从各克隆取样电泳，每个克隆都只有一条带。 4）多X个体的发现 无论有几个X，巴氏小体的数量是N-1，也就是说只有一个X有活性。 ;F/S型女人G-6PD的电泳检测;;Xic的失活作用; XIST基因的表达;6、目前难以解释的问题： 1）Turner综合症、 Klinefelter综合症怎样解释？;2）巴氏小体并非在雌性哺乳动物的每一个细胞中都能看到，为什么？ 3）与X连锁的基因并非都失活，为什么？ 4）雌性动物细胞中只有一条X染色体失活，如何控制的？如何选择的？;三 、实验材料及药品 口腔上皮细胞 发根细胞 载玻片 盖玻片 牙签 1N盐酸 硫瑾 95%乙醇 生理盐水 显微镜 ;四 、实验步骤 ; 要求： 观察尽量多的细胞，统计巴氏小体出现的几率。 巴氏小体为女性细胞中所特有的染色体结构，是l条X染色体呈异固缩状态所形成，各实验室所统计的观察率不尽相同，从30％一50％不等，有些实验室中在男性的细胞中发现X小体有2%的出现率，但小体结构不规范、典型。 巴氏小体直径为lμm左右，其形状有微凸形、三角形、卵形、短棒形和双球形等。观察时需注意巴氏小体与细胞的比例.巴氏小体一般位于核膜附近（为什么？），颜色比周围的核物质深。 正常女性细胞中仅可观察到1个巴氏小体，而正常男性细胞中无巴氏小体或仅在个别细胞中有不典型的巴氏小体存在。 ;;五 作业、思考题 1、绘制巴氏小体图片 2、掌握概念：巴氏小体、性染色质、X小体、 剂量补偿效应 3、巴氏小体一般位于核膜附近，为什么？ 4、请查阅相关文献指出巴氏小体研究的新进展。;在细胞周期的S期中，异染色质比真染色质更晚进行复制，因为它螺旋化与其他染色体不同步，而至使被推挤到核膜边缘 。