第二章 授精技术.ppt

第二章 授精技术 第一节 人工授精技术的基本流程 第二节 精液保存技术 第三节 体外受精技术 第一节 人工授精(AI)的基本流程 一、精液的采集 1、采精前的准备 （1）采精场 固定；宽敞、平坦、清洁、安静；消毒装置。 （2）台畜（dummy） 真：活畜，同种母畜或阉畜，健康无病、体格强壮、体型适中、性情温顺的发情母畜为最好。 假：架子表面包裹一层畜皮或麻袋、人造革等弹性柔软物品。方便、清洁、安全、有效。 （3）种公畜的准备 ①精液的质量与公畜饲养管理、运动和配种利用是否合理有密切的关系。 ②爬跨和诱情方法 让公畜在母畜附近作瞬间停留，或进行多次假爬跨；更换台畜，改变台畜位置；观摩另一头公畜爬跨等等 。 2、采精技术 （1）假阴道法 ： 牛、羊、马、驴、兔 （2）手握法： 猪 （3）筒握法 ：1和2的结合 （4）电刺激法：育种价值高、因损伤或性反射慢等失去爬跨能力；不适宜用其他方法采精的动物。 （5）按摩采精法： 牛、犬和禽类的采精 3、采精频率 指每周对公畜的采精次数。 牛：2-3天，每天可连续采精两次，间隔20min。第二次的数量和质量较好。青年公牛应当酌减。 猪：射精量大，适当控制。成年隔日采精一次。青年公猪（1岁左右）和老龄公猪（4岁左右）每周以采精2次为宜。 绵、山羊：配种季节短，射精量少；而睾丸体积较大，精子的生产量及贮存量相对较大。因此，在配种季节内集中连续每日采精3~4次均可，每周应休息一天。 二、精液品质检查 1、感官：射精量、色泽、气味、云雾状 2、密度：估测法、计数法、光电比色法 3、活力 4、畸形率 5、顶体完整率 6、存活时间和存活指数 存活时间：在一定条件下的总生存时间，第一次检查时间至倒数第二次检查之间的间隔时间，加上最后一次与倒数第二次检查时间的一半，其总和时间即为存活时间。 存活指数：每相邻前后两次检查平均活率与间隔时间乘积的总和。 两者与受精率密切相关，也是鉴定精液处理效果的方法之一。 三、精液的稀释 1、精液稀释液 （1）扩容剂：与精液有相等的渗透压；营养剂或保护剂结合承担 （2）营养剂：葡萄糖、果糖、乳糖等糖类以及鲜奶 （3）保护剂 ①缓冲物质：柠檬酸钠、磷酸二氢钾、Tris ②非(弱)电解质 ：糖类、氨基乙酸、 ③防冷刺激物质 ：卵黄和奶类 ④抗冻物质 ：甘油和DMSO ⑤抗菌物质 ：抗生素 抗生素对猪精液保存效果 大肠杆菌等G-中有精子凝结因子，可在短时间内使精子活力、顶体完整率、pH值大幅度下降。 青、链霉素对G+有效；庆大霉素抑制好氧菌的效果比青链霉素的好。 恩诺沙星稳定、灭菌、无毒，作用于G+和G-、霉形体、支原体等。 ⑥其他添加剂 酶类:超氧化物歧化酶 ( SOD ) 激素类：OXT 其他：褪黑激素 (MT) 、维生素C、CO2、 己酸、ATP、精氨酸、咖啡因 SOD对羊精液保存效果 SOD是生物体中唯一直接地、特异地消灭超氧自由基的抗氧化酶，可以保护机体免受自由基的损害，达到延缓衰老的作用。SOD能提高山羊精子膜完整率和顶体完整率。延缓精子的衰老呈剂量依赖关系。 褪黑激素对猪精液保存效果 MT可有效清除化学反应中产生的羟自由基，抑制过氧化氢引起的过氧化脂质含量的升高，其作用比VE、VC、谷胱甘肽均强。增加谷胱甘肽氧化酶的活性，还可通过对调亡抑制基因bcl-2的调控作用而控制细胞程序化死亡。 2、精液稀释原则与方法 （1）稀释液的配制 容器消毒 称量 溶解 过滤 煮沸(高压) 冷却 添加抗生素等 (2) 稀释原则 同温:稀释液与精液的温度必须相等 方向:稀释液沿杯壁缓缓加入精液中。 及时： 3、精液的稀释倍数 ①畜种特征 ： 羊、牛高，猪、马低 ②稀释液种类 ： 奶类倍，糖类低 ③保存方法： 冷冻低，液态高 ④每头份最低活精子数：牛0.05-0.1亿、羊0.5亿、猪2.0亿、马1.5亿 以牛为例：若射精量为8ml，每ml精子数为12亿，活精子数为70%，每次输精最低活精子数为500万，则稀释倍数为12亿×70%÷0.05亿=168倍 四、精液保存：常温、低温、超低温 （第二节介绍） 五、授精 （insemination） 1、输精前的准备 （1）器械洗涤和消毒 （2）母畜：保定，外阴擦洗、消毒。 （3）精液品质：液态=0.6，冷冻=0.3 2、输精的基本技术要求 （1）输精量和输入的活精子数 根据畜种和精液保存的方法确定 （2）输精时间：一般说来，各种动物都适宜在排卵前4