地中海贫血基因诊断PPT.ppt

地中海贫血基因诊断 地中海贫血 3个α缺失→β4 C. 标准型α地中海贫血（α0/αA或α+/α+） A.重型β地中海贫血 患者不能合成β链 α链过剩而沉降到红细胞膜上，引起膜的性能改变，发生严重的溶血反应，引起肝脾增大。 组织缺氧，促进红细胞生成素分泌，刺激骨髓增生，骨质受损变得疏松，可出现鼻塌眼肿、上颔前突、头大额隆等特殊的“地中海贫血面容”。 B.中间型β地中海贫血 一般是β+地中海贫血基因的纯合子，患者的基因型通常为β+（高F）／β+（高F）或β+／δβ+。病人的症状介于重型和轻型之间，故称为中间型。 D.遗传性胎儿血红蛋白持续增多症 HbFα2γ2 遗传缺陷导致δ和β基因表达受到抑制，而γ链合成却异常增高，使成人红细胞内的胎儿血红蛋白HbF持续增多。 地中海贫血的分子机制 α地中海贫血的分子机制 地中海贫血基因诊断 LOGO 地中海贫血介绍 1 发病机制 2 基因诊断和治疗 3 1925年,Cooley描述了一个幼儿患有贫血,并伴发有有核红细胞增多症.此后,意大利,希腊等地中海区域也陆续发现并报道类似疾病,因该病首先在地中海区域发现,因此被称为地中海贫血.(thalassemia). “地中海贫血症”来源 地中海贫血症介绍 地中海贫血(THAC)是一种较为常见的单基因遗传性疾病，多出现在我国的南方各省，又以海南及两广沿海地区多发。 其主要致病机制为α珠蛋白或β珠蛋白基因出现缺失或具有缺陷，从而引起血红蛋白中不同肽链出现合成比例失衡，进而导致了溶血性贫血疾病的发生。 珠蛋白基因的结构及表达 1.珠蛋白基因的结构 α珠蛋白基因簇 16p13 β珠蛋白基因簇 11p15 地中海贫血的分型 ·α地中海贫血：根据造成人贫血病情的严重性将其分为4种类型。 ·β地中海贫血：根据造成病情的严重性分为3种类型： ·重型地中海贫血 ·中间型地中海贫血 ·轻型地中海贫血 α地中海贫血(α地贫)的类型 名 称 基因型 缺失基因 a 链的合成 Bart’s 水肿胎儿综合征 a 0 / a 0 ―― / ―― 0 HbH 病 a ＋ / a 0 α― / ―― 25 ％ 标准型 a A / a 0 αα / ―― 50 ％ a ＋ / a ＋ α― / α― 静止型 a A / a ＋ αα / α― 75 ％ 正 常 a A / a A αα / αα 100 ％ 缺失一个α基因——尚有部分α链合成者，α+地贫； 缺失两个α基因——α链完全不能合成者，α0地贫。 4个α基因缺失→→α珠蛋白缺失→→γ4/高氧亲和力→→组织严重缺氧 A.Hb Bart’s胎儿水肿综合症 B.血红蛋白H病（α0/α+） 高氧亲和力→组织缺氧 H包涵体→溶血→贫血 D. 静止型α地中海贫血（α+/αA） 重型?地贫：(?0／?0 、?+／?+、??0／??0 ) 轻型?地贫：(?0／?A 、?0／?A、??0／?A ) 中间型?地贫：(?+(高F)／ ?+(高F) 、?+／??+) 遗传性胎儿血红蛋白持续增多症(HbFα2γ2) 地贫临床类型 ? β珠蛋白生成障碍性贫血 C.轻型β地中海贫血 发生于β0或β+地中海贫血基因的杂合子，无任何临床症状。 ? 地中海贫血的分子机制 基因缺失：缺失型α地中海贫血 基因突变：非缺失型α地中海贫血 基因缺失 基因突变 编码序列突变； 转录调控序列突变（TATA box)； RNA加工和修饰信号序列突变（GT-AG接头） 地中海贫血基因诊断 α地中海贫血的基因诊断步骤 PCR 扩增 缺失型突变检测PCR 反应条件为:95℃预变性5min，98℃ 45s，66℃ 30s，72℃ 3 min，35个循环，最后72℃延伸5 min。 非缺失型突变检测PCR反应条件为:94℃预变性5 min，94℃ 60s，55℃ 30s，72℃60 s，35个循环，最后72℃延伸5min。 基因型分析 将上述PCR扩增产物与膜条100℃ 变性10min，43 ℃杂交2h以上，洗膜，加入酶标抗生物素蛋白，再次洗膜，加入酶底物显色，具体步骤按说明书进行操作。杂交及显色完成后，观察膜条上的蓝色斑点，若只有野生型探针处(N)显色，为该位点的野生纯合子;若只有突变型探针处(M)显色，为该位点的突变纯合子; 若野生型探针处(N)和突变型探针处(M)均显色，为该位点的杂合子。 α地中海贫血的基因诊断结果 样本基因型 缺失型和非缺失型α－