紫外线杀菌作用和脓杆菌分离培养.ppt

2，革兰染色：脓标本，观察混合细菌的种类、染色性和形态 注意：上次革兰染色实验所使用的是菌苔，所以在涂片前需加生理盐水，而本实验所使用的是菌液，在涂片前不需加生理盐水，且由于本次实验所使用的脓标本菌液较稀薄，所以为了方便大家观察结果，需涂抹5-6环或8-9环的菌液。 实验方法 实验报告内容 1、目的和要求 2、实验原理 3、材料 4、步骤 5、结果 6、讨论 医学微生物学实验三 医学微生物学实验三 医学微生物学实验三 医学微生物学实验三 医学微生物学实验三 医学微生物学实验三 医学微生物学实验三 医学微生物学实验三 医学微生物学实验三 医学微生物学实验三 医学微生物学实验三 第三次实验 安徽医科大学微生物学教研室 2012.03 合肥 医学微生物学 实 验 三 (一)示教 1、多媒体 ①噬菌体溶菌现象 ②炭疽芽胞杆菌串珠实验 2、模型: 变形杆菌迁徙生长现象 (二)操作 1、紫外线杀菌作用：菌种为金葡菌和大肠埃希菌 (两人一碟,四人一组) 2、脓标本的分离培养(一):混合金葡菌和大肠埃希菌标本在普通培养基上四区划线分离单菌落并做革兰染色 实 验 三 噬菌体溶菌现象示教 噬菌体(bacteriophage, phage)是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物的病毒的总称，因部分能引起宿主菌的裂解，故称为噬菌体。 在营养琼脂平皿上培养A.普通大肠杆菌+噬菌体 结果显示仅B平皿上出噬斑现象 A B 噬菌体的噬斑现象 迁徙状生长现象示教 菌种：变形杆菌 变形杆菌在固体培养基上呈扩散性生长,形成以菌接种部位为中心的厚薄交替,同心圆型的层层波状菌苔,这种现象称为迁徙生长现象。 如培养在含0.1％石碳酸培养基上，细菌不能产生鞭毛，没有迁徙现象而呈现单个菌落。 在营养琼脂平皿上培养的变形杆菌迁移状生长 A.变形杆菌在营养琼脂上呈现丛集样生长 B.变形杆菌在含有1%石炭酸营养琼脂上的呈点状生长 （营养琼脂，18h，37℃） A B 细菌迁移状生长现象 串珠试验示教 菌种：炭疽杆菌 炭疽杆菌（Bacillus anthraci）属于需氧芽孢杆菌属，菌体粗大，两端平截或凹陷，是致病菌中最大的细菌。排列似竹节状，无鞭毛，无动力，革兰氏染色阳性。菌落呈毛玻璃状，边缘不整齐，呈卷发状。能引起羊、牛、马等动物及人类的人畜共患急性、热性、败血性传染病。表现为脾脏显著肿大；皮下及浆膜下结缔组织出血性浸润；血液凝固不良，呈煤焦油样。炭疽杆菌曾被帝国主义作为致死战剂之一。平时，牧民、农民、皮毛和屠宰工作者易受感染。 利用青霉素处理炭疽杆菌，可以破坏细菌的细胞壁中的肽聚糖，所以造成细菌内部的渗透压大，造成细菌膨胀变圆，呈串珠状排列。此现象是炭疽芽孢杆菌所特有的，具有鉴别意义。 A B 革兰阳性需氧芽胞杆菌 炭疽芽胞杆菌 A.炭疽芽胞杆菌纯培养的镜下形态(革兰染色) B.炭疽芽胞杆菌兽血涂片的镜下形态(瑞氏染色) 炭疽杆菌革兰染色 青霉素处理炭疽杆菌形成的串珠现象 菌种：金葡菌、大肠埃希菌（二人一碟、四人一组） 方法：密集划线 步骤：用接种环（无菌）取细菌培养物在无菌的普通琼脂平板上做密集划线后置于紫外灯下，将皿盖盖一 半，接受紫外线照射30min；然后倒置温箱培养18~24h后，观察结果。 紫外线杀菌作用操作 注意事项： 1、无菌操作 2、密集划线使细菌充分较均匀地分散在培养基表面 3、在平皿背面作好标记（标本名称，姓名，日期，班级)，再进行紫外线照射和培养 . 1 2 3 4 1 图示 脓标本的分离培养（一） 实验目的 1、掌握细菌分离培养的方法 2、掌握细菌单个菌落的观察 3、熟悉混合标本的分离鉴定程序 实验原理 将待检材料进行分离培养，常用的分离接种法是琼脂板分区划线法，是借划线将混杂的细菌在琼脂平板上分开来，使个别的细菌能固定在某一点，经培养繁殖后形成单个菌落，以达到分离获得纯种细菌，再进一步鉴定的目的。今天实验主要使用的是分区划线法中的四区划线法。 1、脓标本 2、培养基（普通琼脂平皿），革兰染色液一套 3、生理盐水、载玻片、接种环、酒精灯等 实验材料 1，四区划线：脓标本 接种环烧灼灭菌后取标本涂布与平板1区内作数次Z形划线，再在2、3、4区依次Z形划线（注意：划完一区后应烧掉环上的残菌 ） 。 每一区的划线与上区交叉接触，每区保持一定距离，密而不重，如此后一区菌量少于前一区，逐渐减少以至划线上的细菌呈单个菌分布。37℃温箱倒置培养18～24小时。并作革兰染色观察混合细菌的种类、染色性和形态。 实验方法 1 2 3