API HPLC-MS-MS定性分析步骤.pdf

LC-MS/MS定性分析思路与方法 美国应用生物系统中国公司 应用技术服务部 Opportunities in the Services and System Solutions Market LC-MS/MS 定性分析可用的几种方式： ● 综合各种信息：理化性质，来源，NMR，X-RAY ，LC-UV 等等 2 ● 库检索- PIS (MS ) -不同的碰撞能量，谱图不同 ● 利用HRMS-QSTAR n ● 直接进样-MS ，LC-MS全扫描，IDA ● 谱图解析-Prec，NL，Prod等等 ● 标准品对照 ● 合成推断的化合物-验证 2 Date | AB CONFIDENTIAL © 2006 Applied Biosystems Opportunities in the Services and System Solutions Market 准备工作 ● 核对样品,名称,编号 ● 通过询问样品提供人，查阅文献等，了解样品其他知识， 例如熔点，沸点，溶解性等理化性质，样品来源，合成路 线，光谱，波谱数据等； ● 可能含有的杂质，样品大致含量, 等等； ● 样品保存状况，对温度，光敏感否； ● 进行LC-MS分析前最好摸好LC条件，能够基本分离，流动相 缓冲体系符合MS要求； ● 色谱柱和管路的清洗 新的色谱柱以及分析过大量样品的系统，可能要先冲 洗很长时间才能干净,某些样品非常容易吸附在进样阀和管 路中，尤其是采用针泵进样时，先用空白溶剂充分清洗管 路。 3 Date | AB CONFIDENTIAL © 2006 Applied Biosystems Opportunities in the Services and System Solutions Market 准备工作 ● 如原来溶解样品的溶剂,若不合适LC-MS,N2吹干,再用流动相 定量溶解。溶解样品的溶剂一定要和流动相一致，否则得 到的谱图不纯，峰形不好，变宽，出怪峰，甚至均为溶剂 峰。 某些固体直接用流动相不溶，可以先加一滴DMSO，再加 甲醇或乙腈等稀释。 ● 进样顺序要先稀后浓，定量溶解，浓度控制在几个ppM 级，不然易污染系统，造成本底太高影响分析结果。 ● 浓度非常低的样品不能保存太长时间，容器吸附、分解等 原因使样品浓度降低，样品工作液现配现做。 4 Date | AB CONFIDENTIAL © 2006 Applied Biosystems Opportunities in the Services and System Solutions Market 色谱柱选择 ● 选择原则:定性可长些,能够基线分离最好，若做不到，可 以通过提取离子XIC来得到较好的色谱图。内径无要求，粗 细均可，从5mm到细径柱如2mm,1mm的,用细径柱IS可不分流, 对于API2000，3000的TIS，如4.6mm柱用1ml流量时灵敏度 还不是最佳,不如流量低时更好，对于Turbo V源，可不分 流，灵敏度更高。 ● 要对各种厂家的色谱柱有所了解，对于一些特殊的化合物 必需使用特殊的色谱柱进行分离。 相关的知识可以向色谱柱供应商索取。 大多数著名的色谱柱厂商都有自己的色谱柱分析数据库， 里面可能会有你想要的信息。 5 Date | AB CONFIDENTIAL © 2006 Applied Biosystems Opportunities in the Services and System Solutions Market LC条件的优化 ● LC梯度的设定,目的是快速分离,峰形好,缩短时间,提高效 率,可以将所有化合物都冲出，防止影响下一个样品的测 定。 采取梯度洗脱，如分析多肽类化合物一般采取梯度洗脱， 此时的信号会比等梯度洗脱时强很多，而且可以加大进样 量，是提高灵敏度的一种有效措施，但是分析时间较长， 且需要有色谱柱平衡的时间。 6 Date | AB CONFIDENTIAL ©