如何选用培养基与培养细胞注意事项.pdfVIP

生物秀实验频道——努力做您的实验助手 ！  /bio101/  培养基手册  培 养 基 手 册 MEDIA HANDBOOK  M E D I A H A N D B O O K  （2005） （ 2 0 0 5 ） 如何选用培养基及培养细胞注意事项 如 何 选 用 培 养 基 及 培 养 细 胞 注 意 事 项 生物秀搜集整理 生 物 秀 搜 集 整 理 w w w . b b i o o . c o m 中国生物科学论坛 【生物秀论坛】  0  /bbs/  生物秀实验频道——努力做您的实验助手 ！  /bio101/  一、培养基的历史 体外培养 （in vitro culture） 包括： 组织培养 （tissue culture）、 细胞培养 （cell culture）、 器官培养（organ  culture）。顾名思义，就是将活体结构成分（如活体组织、活体细胞 或者活体器官等）从体内或其寄生体内取出，放在类似于体内生存环境的体外环境中， 让其生长发育的方法。广义组织培养与体外培养同义。 体外培养已经历了约一百年的发展历史，但发展初期进程比较缓慢，没有引起很多 学者的重视。直到上世纪 50 年代后期，体外培养技术才广泛应用于生物学研究的各个 领域，使这项技术得到飞速发展。现在体外培养已成为细胞工程、基因工程、抗体工程 的重要组成部分。 细胞培养指从生物机体取出部分组织分散成单个细胞或直接从机体取出单个细胞， 也可把体外培养细胞分散成单个细胞在体外条件下培养，细胞能继续存活与增殖。培养 过程中细胞不再形成组织。 发展与完善细胞培养技术围绕防止污染、改进培养方法、设计新型培养容器、设计 不同的培养液等几个方面进行。  1885年 Roux温生理盐水培育鸡胚组织；  1903年 Jolly，1906年 Beebe等发明了盖片悬滴培养；  1907年 Harrison 培养蛙胚神经成功，开始创建盖片凹玻璃悬滴培养法；  1910、1912年 Carrel采用无菌操作、更新培养基、传代，完善了悬滴培养法；  1924年 Maximow 采用双盖片悬滴培养法；  1923 年 Carral设计创立了卡氏瓶培养法，用此法可根据需要随时更换培养液，既 有利于组织不断生长，又可以运用不同种类的营养液培养不同的细胞，极大地推动了当 时组织培养研究。  Earle 等加以改进，使大量细胞能直接生长于玻璃瓶壁上，培养了正常细胞与肿瘤 细胞的细胞株。至此大多数研究人员都采用培养瓶培养细胞。 组织培养从二十世纪 40年代起迅速发展,在培养容器、培养基和培养技术等方面出 现了很多革新。 在培养容器方面,  由简单的用试管、旋转管培养，发展到多种培养瓶培养，近年来， 塑料瓶、皿、多孔培养板的使用已日趋普遍。 在培养基方面，从 50年代初，Parke、Eagle 等设计出合成培养基后，从纯天然培 养基到合成培养基、从鸡胚浸出液发展到动物血清 （促细胞生长物），直至 60年代设计 中国生物科学论坛 【生物秀论坛】  1  /bbs/  生物秀实验频道——努力做您的实验助手 ！  /bio101/  出无血清培养基。 首先反映在设计不同种类的缓冲盐溶液， 以用来培养不同的细胞和洗涤细胞。E arle  在  1948 年设计了含有碳酸氢钠等盐类的 Earle  氏盐溶液，Hank’s 在  1949 年设计了