目的基因的分离克隆.doc

基 因 工 程 讲 义 主讲教师──李晓玲目 录 第一章 绪? 论…………………………………………………3 一、基因工程的诞生…………………………………………………3 二、基因工程的成就…………………………………………………5 三、基因工程安全性的问题………………………………………… 6 四、基因工程研究的内容…………………………………………… 8 第二章 基因克隆所需的工具酶…………………………… 12 一、限制性内切酶(restriction enzyme)……………………………… 12 二、DNA连接酶…………………………………………………… 20 三、DNA聚合酶…………………………………………………… 24 四、逆转录酶……………………………………………………… 27 第三章 基因的克隆载体?…………………………………… 28 一、质粒载体……………………………………………………… 28 二、大肠杆菌质粒载体 …………………………………………… 30 三、λ噬菌体载体……………………………………………………33 四、粘粒载体（柯斯质粒载体）…………………………………… 35 第四章 目的基因的分离克隆?……………………………… 38 第一节 化学法合成目的基因………………………………………… 38 第二节? PCR技术在基因克隆中的应用……………………………… 38 一、PCR基本技术………………………………………………… 38 二、PCR技术在基因克隆方面的应用……………………………… 42 第三节 基因文库技术分离目的基因………………………………… 45 一、?基因文库的类别…………………………………………………46 二、核基因组文库构建……………………………………………… 48 三、利用PCR技术构建c DNA文库…………………………………49 四、应用差别杂交或扣除杂交法构建cDNA文库…………………… 49 五、人工染色体文库………………………………………………… 50 第五章 重组体的构建、转化及鉴定………………………… 54 一、质粒DNA的分离纯化………………………………………… 54 二、目的基因与载体的连接………………………………………… 54 三、重组体向宿主细胞的导入……………………………………… 54 四、含重组质粒的细菌菌落的鉴定……………………………………56 第六章 克隆基因的表达……………………………………… 59 第一节? 外源基因在原核细胞中的表达……………………………… 60 一、原核生物基因表达的特点……………………………………… 60 二、基因表达的调控序列…………………………………………… 61 三、几种类型的原核表达载体……………………………………… 62 四、 提高克隆基因表达效率的途径………………………………… 63 第二节? 外源基因在真核细胞中的表达……………………………… 68 一、 真核细胞基因克隆载体………………………………………… 68 外源基因导入真核细胞的方法…………………………………72 第七章 重组体的筛选与鉴定…………………………………76 一、遗传检测法…………………………………………………… 76 二、物理检测法…………………………………………………… 78 三、核酸杂交筛选法…………………………………………………79 四、免疫化学检测法………………………………………………… 80 五、DNA—蛋白质筛选法…………………………………………… 81 《基因工程》课程教学大纲 适用专业 生物科学，生物技术 学 时 学 分 4预修课程 普通生物学、遗传学、生物化学、分子生物学 制订日期 2003.5 一、编写说明 （一）本课程的性质、地位和作用 自本世纪70年代基因工程诞生以来，在不到30年的时间内，已取得许多激动人心的成就，并继续向前迅猛发展，成为当今生物科学研究领域中最具生命力、最引人注目的前沿学科之一。基因工程学的出现，给社会发展带来了深刻的影响。许多国家都已把基因工程列为优先发展的高科技项目。 本课程主要介绍基因操作的主要技术原理，基因操作的工具酶，克隆载体，目的基因的分离方法，重组体的构建及导入，克隆基因的表达与检测，基因工程研究进展，存在问题及新策略等内容，使学生具备基因工程方面的基本知识和掌握基因工程基本的操作技术。 （二）本大纲制订的依据 基因工程是生物学科中的高级课程，主要针对高年级本科生和研究生开设。学生在此之前需要掌握普通生物学、遗传学、生物化学、分子生物学等方面的专业知识，以及分析化学、有机化学、无机化学、大学物理等方面的基本