耐高温的dna聚合酶引物模板-阜宁东沟中学.ppt

（PCR） 阜宁县东沟中学 高二生物组 基础知识 1、DNA分子的组成成分和结构 DNA 分子的基本组成单位是 .共有 种,每个基本单位是由一分子的 、 一分子的 、和一分子的 构成。 脱氧核甘酸 4 磷酸 碱基 脱氧核糖 2、脱氧核甘酸的基本结构 基础知识 5’ 2’ 3’ 4’ 1’ 碱基 OH O O P O HO OH O O P O HO 碱基 OH OH 脱氧核糖 磷酸基团 碱基 脱氧核糖 碱基 碱基 脱氧核糖 多脱氧核苷酸链结构简图 O O P O HO 碱基 O OH O O P O HO OH 碱基 基础知识 3、 DNA分子的平面结构 A T G C A G C T 氢键 5端 3端 识别 ： DNA分子的3′ 端与5′ 端 -OH端为3′ ; 磷酸基团的末端为5′。 1.DNA分子的复制需要哪些条件？ 回忆 2.DNA分子的复制的过程是怎样的？ 条件 组分 作用 模板 提供复制的模板 原料 合成DNA子链的原料 酶 打开DNA双链 催化合成DNA子链 能量 ATP 为解螺旋和合成子链供能 引物 RNA 为DNA聚合酶提供合成的3’端起点 1.DNA分子细胞内复制需要哪些条件？ DNA母链 4种脱氧核甘酸 解旋酶 DNA聚合酶 2.DNA分子的复制的过程是怎样的？ 解旋酶 DNA聚合酶 母链 母链 引物 子链 PCR(多聚酶链式反应） 1.定义： 是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。能以极少量的DNA为模板，在几小时内复制出上百万份的DNA拷贝。 2.原理： （1）DNA的热变性原理 （2）DNA复制原理 体外扩增DNA如何提供相似环境？ 打开DNA双链 模板 合成子链原料 催化子链合成 使DNA聚合酶能从引物3′端开始连接脱氧核苷酸 细胞内复制 PCR 解旋酶 DNA母链 4种脱氧核苷酸 DNA聚合酶 引物（ RNA） 变性（ 80-100℃ ） TaqDNA聚合酶 20—30个核苷酸构成DNA或RNA DNA母链 4种脱氧核苷酸 DNA的热变性原理 DNA双链 单链 变性（加热80-100℃ ） 复性（缓慢冷却） 变性的目的： 复性的目的： 解开双链 有利于引物Ⅰ和引物Ⅱ与两条单链的结合 5/ 3/ 3/ 5/ 5/ 3/ 引物Ⅰ 5/ 3/ 引物Ⅱ 变性95oC 复性55oC 延伸72oC 5/ 3/ 3/ 5/ PCR的反应过程