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全内反射荧光显微镜TIRFM介绍
全内反射荧光显微镜系统
Total Internal Reflection Fluorescence
Microscopy (TIRFM)
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TIRFM 原理
内反射是一项依赖于消逝波的技术。
在两种不同折射率介质的临界面上，临界角
的光线几乎被完全反射：
c= sin-1 (n /n ) n n
2 1 1 2
消逝波只能够传播到盖玻片后几百纳米内
典型的有效照明下渗透度只有50nm到100nm
低折射率
高折射率
q
只有临近盖玻片表面 （近场）的荧光分子才能
被激发。远场分子不受激发。
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荧光观察图像景深范围
LSM
CCD
聚焦位置
TIRFM
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棱镜型TIRFM Vs 物镜型TIRFM
OLYMPUS OLYMPUS
可用于微分干涉观察DIC 安装简单 安装简单
高数值孔径物镜 高数值孔径物镜 可用于膜片钳实验
可连接原子力显微镜AFM 物镜数值孔径受限制
可用于显微注射和膜片钳实验
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全内反射照明的切
宽场荧光照明
宽场荧光照明
盖波片
盖波片
物镜
物镜
激光
激光
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全内反射照明的切
盖波片
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