免疫7-8, ELISA, 凝集实验 20150106 cyx.pdf

  1. 1、本文档共29页,可阅读全部内容。
  2. 2、有哪些信誉好的足球投注网站(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
  3. 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载
  4. 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
免疫7-8, ELISA, 凝集实验 20150106 cyx

《微生物学与免疫学实验》 本学期的免疫学实验内容 八个实验,四周完成: 1. 抗血清的制备与分离(1) 2. 巨噬细胞的分离与形态观察(1) 3. 抗体的纯化——硫酸铵沉淀(2) 4. 双向琼脂扩散——检测特异性抗体(2) 5. 酶标抗体制备及其提纯(3) 6. 单向琼脂扩散——测抗体效价(3) 7. 酶联免疫吸附试验——ELISA(4) 8. 凝集试验——快速检测(4) 今天的实验内容与要求 • 实验7. 酶联免疫吸附试验(ELISA) • 实验8. 间接凝集试验法检测血清类风湿因子(凝集试验) 要求: • 掌握ELISA的技术原理与操作方法 • 了解检测血清类风湿因子的免疫学快速检测方法—— 凝集试验 今天的上课流程: ① 进行实验7. ELISA 的“封闭”步骤的操作,等待30min ② 讲解约30min ③ 进行实验7. ELISA的一抗加样,孵育等待30min ④ 进行实验8. 凝集试验的操作 ⑤ 进行实验7. ELISA的二抗加样,孵育等待30min ⑥ 进行实验7. ELISA的显色步骤,孵育15min,观察结果 实验7. 双抗体夹心ELISA法检测人血清中 的抗体含量 1. 抗体包被:将羊抗人IgG抗体预先包被于96孔酶标板上,包 被量是100 µl/孔,4℃包被过夜(已完成); 2. 封闭:每小组领取1个板框,内含1条12孔的板条,在水槽中 甩净孔中液体,加入约400µl PBST洗涤液,注意别溢出,静 置30秒,甩净,扣干。然后,用记号笔标记小组号和孔编号, 每孔加入200 µl的2%小牛血清,放入37 ℃温育30 min ; 1 2 3 4 5 8 9 10 11 12 A 同学 B同学 酶联免疫吸附实验 (enzyme-linked immunosorbent assay ,ELISA) 1. 将抗原或抗体吸附于固相载体表面,并保持其免疫 学活性; 2. 将抗原或抗体进行酶标记,并使酶标产物保持其免 疫学的特异结合活性和酶学的信号放大活性; 3. 利用抗原抗体的特异性免疫反应以及酶的催化活性 进行抗原抗体的定性或定量分析。 ELISA的一般实验步骤 间接ELISA为例 1. 包被 反应产物 ↓ 2. 封闭 (6) ↓ 加入底物 3. 加样(抗原抗体反应) (5) ↓ (4) 4. 加酶(酶标抗体结合) 酶标抗体 ↓ 抗原抗体结合 结合 (3) 5. 显色(加底物) 包被 封闭 ↓ (1) (2) 6. 读值(测定显色反应) 包被(Coating): 以物理吸附的方式使抗原

文档评论(0)

dajuhyy + 关注
实名认证
内容提供者

该用户很懒,什么也没介绍

1亿VIP精品文档

相关文档