分子生物学第章分生物学究法分子生物学研究法下.pdf

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2017-10-13 发布于天津
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分子生物学第章分生物学究法分子生物学研究法下

分子生物学分子生物学第第五章章分分子生物学生物学研究法究法（下） ——基因功能研究技术夏玉琼 2012-10-12 2 本次课的学习内容和学习目标本次课的学习内容和学习目标掌握掌握 RNAi技术技术了解基因芯片及数据分析基因芯片及数据分析基因芯片技术原理、基因芯片的制作、基因芯片的数据分析数据分析利用酵母鉴定靶基因功能一步置换法、两步置换法、外源基因的鉴定其它分子生物学技术其它分子生物学技术凝胶缓滞实验、噬菌体展示技术、蛋白质磷酸化分析技术析技术 3 目录目录 6.1基因表达研究技术 626.2基因敲除技术基因敲除技术 6.36.3蛋白质及蛋白质及RNARNA相互作用技术相互作用技术 6.4基因芯片及数据分析 6.5利用酵母鉴定靶基因功能 6.6其它分子生物学技术 4 6356.3.5RNAiRNAi技术技术利用双链小RNA高效、特异性降解细胞内同源同源mRNAmRNA从而阻断靶基因表达从而阻断靶基因表达，使细胞出使细胞出现靶基因缺失的表型 1998年安德鲁·法尔在1998年Nature上发表了该技术表了该技术对线虫注射外源双链对线虫注射外源双链RNA可诱发与之高度同源可诱发与之高度同源的基因序列的特异性“沉默” 5 6356.3.5RNAiRNAi技术技术对触发物的加对触发物的加工 Dicer将细胞中长的外源双链RNA降解成21-25bpp 的小分子干扰RNA（siRNA）与目标与目标mRNAmRNA的结合的结合 siRNA与目标mRNA结合目标mRNA的降解目标mRNA的降解 siRNA的反义链指导合成”RNA诱导的沉默复合体（（RISCRISC）的核糖体）的核糖体”” RISC介导切割mRNA中与siRNA反义链互补的区域域，从而干扰靶基因表达从而干扰靶基因表达 6 6356.3.5RNAiRNAi技术技术 Dicer 外源双链RNA siRNA 细胞内细胞内mRNAmRNA RISCRISC切割切割细胞内mRNA 干扰靶基因表达 7 RNAiRNAi技术的应用技术的应用非哺乳动物可利用较长的可利用较长的dsRNAdsRNA直接诱导直接诱导RNAiRNAi,无需专门无需专门合成si