基因工程试题整理精选篇(高教版)2013.pdf

一、名词解释 基因工程技术： 按照人们的愿望，进行严密的设计，通过体外 DNA 重组和转移等技术，有 目的地改造生物种性，使现有物种在较短的时间内趋于完善，创造出新的生物类型。 质粒 是一种染色体外的稳定遗传因子，大小从 1-200kb 不等，为双链、共价闭合环状 DNA 分子 cccDNA ，并以超螺旋状态存在于宿主细胞中，它具有自主的复制和转录系统。质粒在细 胞内的复制一般有二种：紧密控制型（ stringent control ）和松弛控制型（ relaxed control）。前者 只在细胞周 期的一定阶段进行复制，通常每个细胞内只含有一个或几个质 粒分子；后者在整 个细胞周期中随时可以复制，在每个细胞中 有许多拷贝。 质粒的不相容性 ：利用共同复制系统的不同质粒不能在同一宿主细胞中共存。 从细胞中分离质粒 DNA 的方法 都包括 3 个基本步骤：培养细菌使质粒扩增；收集和裂解细 胞；分离和纯化质粒 DNA 。 溶菌酶 ：破坏菌体细胞壁； SDS 和 Triton X-100 ：使细胞膜裂解。 染色体 DNA 通常用于构建基因组文库和 Southern 杂交等。 基因组 DNA 的提取 植物基因组 DNA 提取 ：提取缓冲液（ Tris.Cl — 保持 pH,EDTA,NaCl,SDS ），氯仿 /戊醇 / 乙 醇溶液 —沉淀和抽提 DNA ，异丙醇 —沉淀 DNA （提染色体），TE （Tris.Cl,EDTA ）--溶解 DNA ，RNase— 保存液，降解 RNA ，NaAC— 加盐， 70%乙醇—漂洗。 细菌基因组 DNA 提取： SDS，蛋白酶 K ，氯仿：异戊醇（ 24：1）-- 沉淀 DNA ，苯酚：氯 仿：异戊醇（ 25：24 ：1）-- 抽提， 70%乙醇— 漂洗， TE,NaCl— 调节离子强度， RNase A， CTAB/NaCl 溶液 —CTAB-- 一种阳离子去污剂，具有从低离子强度溶液中沉淀核酸和酸性多聚糖 的特性，异丙醇 /无水乙醇 —沉淀上清液。 总 RNA 制备 :mRNA 的分子结构容易受到 RNA 酶的攻击反应而降解，加上 RNA 酶极为稳 定而且广泛存在，因此，在提取过程中应严格 防止 RNA 酶的污染并设法抑制其活性 ，这是实 验成败的关键。仪器 —玻璃器皿： 200℃烘 2h，塑料器皿： DEPC 水液处理 — 所有器皿最后硅烷 化处理。 RNA 酶抑制剂： DEPC-- 强烈但不彻底，与氨水溶液混合会产生致癌物； 异硫氰酸胍 --最有 效，使 RNA 酶失活； 其他 -- RNA 酶蛋白抑制剂（ RNasin）SDS, 尿素等。 细胞内总 RNA 制备方法 ：异硫氰酸胍热苯酚法、酚 /SDS 法、 Trizol 法。（均先将组织在液 氮中研磨成粉末） 异硫氰酸胍热苯酚法 ：异硫氰酸胍 (GIT) 与 β－巯基乙醇共同作用抑制 RNase 的活性， GIT 与 十二烷基肌氨酸钠 (Sarcosyl)作用使蛋白质变性。 酚/SDS 法： 用酚和 SDS 破碎细胞和去除蛋白质，用 LiCl 选择沉淀 RNA 以去除 DNA 和其 它不纯物。 Trizol 法：Trizol 试剂（含酚、异硫氰酸胍和溶解剂等）。 mRNA 提取 制备 mRNA 原理： 分离的总 RNA 可利用 mRNA3’ 端含有 poly(A) 的特点，用 oligo(dT) 纤维 素柱分离，当 RNA 流经 oligo(dT) 纤维素柱时，在 高盐 缓冲液作用下， mRNA 被特异的 吸附 在 oligo(dT) 纤维素上，然后逐渐降 低盐 浓度洗脱，在低盐溶液或蒸馏水中， mRNA 被洗下 。然后 经过两次