- 1、本文档共22页,可阅读全部内容。
- 2、有哪些信誉好的足球投注网站(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
大学基因工程
基因工程复习归纳
第一章 绪论
1.基因工程的定义:是指按照人们的愿望,经过严密的设计,将一种或多种生物体(供体)的基因
与载体在体外进行拼接重组,然后转入另一种生物体(受体/宿主)内,使之按照人们的意愿稳定
遗传、并表达出新的性状的技术。
2.基因工程概念的发展:遗传工程→DNA 重组技术→分子/基因克隆(Molecular/Gene→基因工程→
基因操作。应用领域以“基因工程” 、“DNA 重组”为主
基因工程基因工程的历史性事件
1973:Boyer 和 Cohen 建立 DNA 重组技术
1978:Genetech 公司在大肠杆菌中表达出胰岛素
1982:世界上第一个基因工程药物重组人胰岛素上市
1988:PCR 技术诞生
1989:我国第一个基因工程药物 rhIFN α1b 上市
2003: 世界上第一个基因治疗药物重组腺病毒 p53 上市
3.基因工程的三大关键元件
基因(供体):外源基因、目的基因
载体:能将外源基因带入受体细胞,并能稳定遗传的 DNA 分子(克隆载体、表达载体)。
宿主(受体):,能摄取外源 DNA、并能使其稳定维持的细胞(组织、器官或个体)。
4.基因工程的基本步骤 (切、接、转、增、检(大肠杆菌是中心角色)
(1)目的基因的获取:从复杂的生物基因组中,经过酶切消化或 PCR 扩增等步骤,分离出带有目
的基因的 DNA 片断。
(2 )重组体的制备:将目的基因的 DNA 片断插入到能自我复制并带有选择性标记(抗菌素抗性)
的载体分子上。
(3 )重组体的转化:将重组体(载体)转入适当的受体细胞中。
(4 )克隆鉴定:挑选转化成功的细胞克隆(含有目的基因)。
(5 )目的基因表达:使导入寄主细胞的目的基因表达出我们所需要的基因产物。
第二章 DNA 重组克隆的单元操作
一、用于核酸操作的工具酶
1. 限制性核酸内切酶(主要存在于原核细菌中,帮助细菌限制外来 DNA 的入侵) 。
限制性核酸内切酶的功能与类型
主要特征 I 型 II 型 III 型
功能 限切/修饰 限切 限切/修饰
蛋白结构 异源三聚体 单体 异源二聚体
辅助因子 ATP Mg2+ SAM Mg2+ ATP Mg2+ SAM
识别序列 TGAN8TGCT 旋转对称序列 GAGCC
AACN6GTGC CAGCAG
切割位点 距识别序列 1kb 处 识别序列内 距识别序列下游
24-26bp 处
其中 II 型限制性核酸内切酶:切割位点专一,适于 DNA 重组,是 DNA 重组中最常用工具酶。
特点:1.识别、并切割双链 DNA 分子中特异序列的 DNA 内切酶。2.识别序列为 4 6 碱基对的回文对
称结构 (旋转对称结构)。3.单体蛋白、仅有限制性内切酶活性,无甲基化酶活性。4.切割产物末端:
5’突出末端、3’突出末端、平头末端.6.最适温度:大多为 37℃,适盐浓度:高盐、中盐、低盐。8.当
反应条件不适合时,识别和切割序列发生变化 (星号反应)。
星活性(star activity ):在极端非标准条件下,限制酶能切割与识别序列相似的序列,这个改变的
特殊性称星活性。
引起星活性的因素: ① 高浓度甘油(5% )、② 酶过量(100U/g )、③ 低离子强度(25mM )
④ 高 pH (pH8.0)、
您可能关注的文档
- 多组分复杂精馏塔的简捷计算.pdf
- 多相谱拟合及数据分析注意事项.pdf
- 多站无源定位最佳配置分析.pdf
- 多效蒸发-氯化钠废水处理-处理量6万吨年.pdf
- 外墙抹灰工程工艺标准.pdf
- 多孔材料 孔分析技术.pdf
- 多花脆兰的雨媒传粉机制——高江云.pdf
- 多联机施工管理.pdf
- 多路径的配置与管理V2.0.pdf
- 多组分玻璃光纤与光纤器件-课件.pdf
- 大学生职业规划大赛《新闻学专业》生涯发展展示PPT.pptx
- 大学生职业规划大赛《应用统计学专业》生涯发展展示PPT.pptx
- 大学生职业规划大赛《音乐学专业》生涯发展展示PPT.pptx
- 大学生职业规划大赛《中医学专业》生涯发展展示PPT.pptx
- 大学生职业规划大赛《信息管理与信息系统专业》生涯发展展示PPT.pptx
- 大学生职业规划大赛《汽车服务工程专业》生涯发展展示PPT.pptx
- 大学生职业规划大赛《水产养殖学专业》生涯发展展示PPT.pptx
- 大学生职业规划大赛《市场营销专业》生涯发展展示PPT.pptx
- 大学生职业规划大赛《音乐表演专业》生涯发展展示PPT.pptx
- 大学生职业规划大赛《音乐学专业》生涯发展展示PPT.pptx
文档评论(0)