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层析工艺在血浆蛋白纯化中的应用
层析工艺在血浆蛋白纯化中的应用
(公司内部交流学习)
赵彦鼎
西安交大保赛生物技术股份有限公司
2008年4月8 日
内容
概述
层析工艺应用于不同血浆蛋白的纯化
白蛋白
免疫球蛋白
凝血因子
纤维蛋白胶
纤维结合蛋白
凝血酶
抗凝血酶Ⅲ
概述
血液制品主要指以健康人血液为原料采用生物学工艺或分离纯化技术制备的生物活性
制剂。
血液制品的制备方法有Cohn氏低温乙醇沉淀法离心法及压滤法层析法等。其中,应用
最多的是40年代发展起来的Cohn法以及改良法。随着生物技术的发展以及市场对产品多元
化及产品质量要求的不断提高,其它的分离手段如层析方法,逐渐在纯化工艺中得到了广
泛应用。
血液中主要蛋白及临床功能如下:
白蛋白的纯化
血浆白蛋白的分离与应用,始于上世纪40年代,由cohn等人所建立的低温乙醇沉
淀法。低温乙醇沉淀法是基于血浆蛋白组分在乙醇溶液中溶解度的差异而实现分离的。
该方法作为一项经典分离技术,虽然有较大的局限性,但其程序简单、溶剂价廉,适
于工业生产,并能有效保持蛋白的活性,所以曾几经改进,仍被广泛应用。
名称 分子量(KD) 等电点 正常含量(mg/dl)
白蛋白(Albumin ) 66 4.6 3500~5500
白蛋白纯化工艺(国内企业)
血浆
PH :7.0~7.2,乙醇加至8%
温度:-1.5℃~-2.0 ℃。离心
组分Ⅰ上清液 组分Ⅰ沉淀
PH :6.9~7.0,乙醇加至25%
温度:-4℃~-5 ℃。离心
组分Ⅱ+Ⅲ上清夜 组分Ⅱ+Ⅲ沉淀
PH :6.0,乙醇加至40% (制备静丙)
温度:-4℃~-5 ℃。离心
组分Ⅳ上清液 组分Ⅳ沉淀
澄清过滤
滤液
PH :4.5,补加醋酸溶液,乙醇至40%
温度:-7℃~-9 ℃,离心
组分Ⅴ沉淀 组分Ⅴ上清液
注射用水溶解,PH :4.5 。乙醇加至12% ,温度:-2℃~-
3 ℃,过滤。
纯化液
澄清过滤,超滤浓缩
白蛋白原液
调整蛋白质20%,调整钠离子为150mm
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