应用mRNA定量分析方法评价药物对肝CYPs酶的诱导作用.pdf

A subsidiary of XenoBiotic Laboratories, Inc. 张玲玲 南京美新诺医药科技有限公司  受试物诱导一个或多个人肝CYPs酶，增加合用药物或自身的代谢清除率，降低合用 药物或自身的药效  受试物诱导的代谢途径使得反应性代谢产物增加，从而导致直接或间接毒性  国家食品药品监督管理局药品审评中心：药物相互作用研究指导原则， 2009 (/guide.do?method=showGuideid=288 ) 2012 ( /zdyz.do?method=largePageid=147)  FDA指导原则草稿本：Drug Interaction Studies —Study Design, Data Analysis, Implications for Dosing, and Labeling Recommendations，2012 (/Drugs/GuidanceComplianceRegulatoryInformation/Guidances/default.htm) 需测定的人肝CYPs酶  CYP1A2，CYP2B6和CYP3A4 CYPs酶诱导的主要作用机制是基因转录水平的提高，通过核受体介导  CYP1A2 ：芳香烃受体(AhR)  CYP3A，CYP2C和CYP2B ：孕烷X受体(PXR)  CYP2B6 ：组成型雄甾烷受体(CAR)介导 描述 CFDA 2009，2012年指导原则 FDA 2012年指导原则 新鲜分离的或冷冻保存的人肝细胞 新鲜分离的或冷冻保存的人肝细胞（至 评价体系 （至少3个志愿者） 少3个志愿者） 永生化人肝细胞 最先CYP1A2和CYP3A4 最先CYP1A2，CYP2B6和CYP3A4 适当时CYP2B6 若CYP3A4诱导，评价CYP2C8，2C9和 评价的CYPs酶 在CYP3A4不诱导时不考虑CYP2C8， CYP2C19 2C9和CYP2C19 终点 仅活性，可以细胞也可以制备微粒体 仅mRNA 阳性 2倍 4倍 代谢产物大于母体AUC 的25% 时，需要 特殊考虑 单独考察 1. mRNA测定 细胞贴壁 诱导 收获细胞 适应2天 2天 测定诱导 2. 活性测定 3. 细胞毒性 CYPs 诱导剂 推荐的浓度（µM ） 诱导倍数（活性） CYP1A2 奥美拉唑 25-100 14-24 CYP2B6 苯巴比妥 500-1000 5-10 CYP2C，CYP3A4 利福平 10-50 4-31 总RNA有三大类： 信使RNA （mRNA ），核糖