微滴度PCR(ddPCR)的原理和必威体育精装版应用.pdf

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微滴度PCR(ddPCR)的原理和必威体育精装版应用

第三代PCR技术——ddPCR的原理和医学应用 ddPCR droplet digital PCR 微滴式数字PCR 陈燕飞,Ph.D. Field Application Specialist, Bio-Rad Laboratories 主要内容  ddPCR的基本原理  ddPCR的技术特征  ddPCR的医学介绍 (ddPCR ,droplet digital PCR ,微滴式数字PCR ) 主要内容 ddPCR的基本原理 (什么是数字PCR ?什么是微滴式数字PCR / ddPCR? ) PCR技术的发展历程(1983-2015年) 第一代 第二代 第三代 更灵敏 更准确 更精确 T100 Thermal Cycler CFX96/384 Real-time PCR QX200 Droplet Digital PCR 普通PCR Real-time PCR 数字PCR 定性分析 间接定量分析 直接定量分析 (依赖C 或C 值,标准品) (无需标准品,绝对定量) t q 第三代PCR技术——数字PCR (digital PCR, dPCR) 基本原理:0或1的反应 (以ddPCR为例) 泊松分布 : 靶标分子 ●: 阳性微滴(1) ○: 阴性微滴(0) : 背景分子 有限稀释 PCR扩增 泊松分布 一个 成千上万个 阴性微滴比例推算 待分析的PCR反应体系 独立的PCR反应体系 起始靶分子的绝对量 数字PCR的核心思想 1992年数字PCR思想的提出 Alec Morley 利用有限稀释,终点PCR和泊松分布实现核酸浓度的绝对定量 The combination of limiting dilution, end-point PCR, and Poisson statistics could yield an absolute meas

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