技术路线图(网络大搜集).pdf

动物水平 临床组织 细胞水平 建立裸鼠肠癌肝转移模型 Y沉默后，细胞增殖能力显著降低 500例肠癌 组织样本收集 表 Y沉默后，过表达X ，细胞增殖有稍许增强 In vivo验证X-Y轴对肠癌 型 X沉默后，细胞增殖被抑制，迁移能力显著降低 细胞体内成瘤能力的影响 免疫组化检测X、 研 Y蛋白表达和定位 究 X沉默后 ，过表达Y对细胞增殖、迁移无显著影响 In vivo验证X-Y轴对肠癌 细胞体内肝转移能力的影响 相关性分析 基因芯片鉴定X、Y 阐明X-Y在肠癌 在肠癌肝转移组织 肝转移模式中的 中特异性高表达 作用及机制 机 半乳糖基转移酶抑制剂验证其在X介导肠癌细胞肝转移中的作用 对目标序列区域进行分 制 析，设计点突变， 验证XY结合的位点 研 qPCR、WB验证X对半乳糖基转移酶的调控 究 对X的序列进行分段，分别 半乳糖基转移酶可能是X调节肠癌细胞肝转移模式的关键 构建载体，用Co-IP的方法 检测与Y结合的区域 基因芯片筛选X沉默后下游分子变化 EMSA/Co-IP实验验证X-Y 的RNA/蛋白相互作用 下游信号通路 X-Y的精细调节机制 形态学观察、倍增时间、细胞活率检测 mES 标准体系培养 生物学特性检测 染色体核型分析、AP 检测 免疫组化、FACS 特异标志物、RT-PCR 检测 EBs 形态学观察 m E RT-PCR 检测 S 非 分 化 mES 分化为EBs LN, FN, E-cadherin 表达差异检测 FACS 检测 增 殖