植物组织培养及其应用.pdf

本科学生实验报告 学号 124120438 姓名 罗政延 学院 生命科学学院 专业、班级 12 生物技术 实验课程名称＿植物愈伤组织培养及其应用＿ 指导教师 郝大海 ＿＿＿＿＿ 开课时间 2014 至＿ 2015 学年＿上 学期 填报时间 2014 年 12 月 12 日 云南师范大学教务处编印 二 0 一一年五月 植物愈伤组织培养及其应用 实验目的 1、掌握培养基母液配制方法 2、掌握培养基配制方法 3、熟悉无菌材料继代、繁殖操作 4、熟悉愈伤组织诱导、再分化技术 5、熟悉试管苗移栽、定植技术 实验原理 植物组织培养是指植物的任何器官、 组织或细胞，在人工预知的控制条件下，放在含有 营养物质和植物生长调节物质等组成的培养基中，使其生长、分化并形成完整植株的过程。 其理论依据是植物细胞具有全能性。 母液配制 1、在植物组织培养工作中，通常先配制一系列母液，即贮备液。所谓母液是欲配制液的 浓缩液，这样不但可以保证各物质成分的准确性及配制时的快速移取，而且还便于低温保 藏。 培养基的成分 水、无机盐、有机物、植物激素、培养物的支持材料、其它辅助性物质。 培养基配制 （一）水 水是植物原生质体的组成成分，也是一切代谢过程的介质和溶媒。它是生命 活动过程中不可缺少的物质。 配制培养基母液时要用蒸馏水，以保持母液及培养基成分的精确性，防止储 藏过程发霉变质。大规模生产时可用自来水。但在少量研究上尽量用蒸馏水，以防成分的 变化引起不良效果。 （二）无机元素(inorganic element) 无机营养成分就是人们平常所说的矿物质、无机盐或无机元素。它们在植物 生活中具有非常重要的作用。 如氮（N）、硫（S）、磷（P）是蛋白质、氨基酸、核酸和许多生物催化剂 即酶的主要或重要组分。它们与蛋白质、氨基酸、核酸和酶的结构、功能、活性等有直接 的不可缺少的关系。 根据植物对这些元素需要量的不同或者根据目前植物培养基中添加的这些元素量的大小， 可将它们分成大量元素和微量元素。 1、 大量元素一般指在培养基中的浓度大于 0.5mmol/L 的元素（或﹥100mg/L）。 2、 微量元素 指小于 0.5mmol/L （或﹤100mg/L）的元素。 培养基的成分—— 大量元素 1. 大量元素 主要包括氮、磷、钾、钙、镁和硫六种。 (1) N ①是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物碱等的组成成分，是生 命不可缺少的物质。 在制备培养基时以硝态氮（NO3-N)或氨态氮（NH4+-N)两种形式供应。 大多数培养基既含有硝态氮（NO3-)又含有氨态氮（NH4+)。氨态氮（NH4+-N)对植物生长较 为有利。供应的物质有 KNO3、NH4NO3 等。有时，也添加氨基酸来补充氮素。 ②缺氮时某些植物的愈伤组织会出现一种很引人注目的花色素苷的颜色，愈伤 组织内部不能形成导管。 (2) P ①是磷脂的主要成分。而磷脂又是原生质、细胞核的重要组成部分。磷也是 ATP、ADP 等的组成成分。 ②在植物组织培养过程中，向培养基内添加磷，不仅增加养分、提供能量，而且 也促进对 N 的吸收，增加蛋白质在植物体中的积累。 ③常用的物质有 KH2P04 或 NaH2P04 等。 ④ 缺磷或钾时细胞会过度生长，愈伤组织表现出极其蓬松状态。 培养基的成分—— 大量元素 (3) K ① 对碳水化合物合成、转移、以及氮素代谢等有密切关系。 ② K 增加时，蛋白质合成增加，维管束、纤维组织发达，对胚的分化有促进作用。 但浓度不易过大，一般为 1-3mg ／L 为好。 ③ 制备培养基时，常以 KCl、KNO3 等盐类形式