流式原理临床应用.pdf

Your EASY Way From Technology To Discovery FC 500 技能操作培训 贝克曼库尔特生命科学部 王莉静 内 容 流式细胞术简介 流式样本制备 流式常用临床检测项目 1 流式细胞术的基本概念  流式细胞术（Flow Cytometry, 简称FCM）是一种 可以快速、准确、客观，并且同时检测单个微粒（ 通常是细胞）的多项特性（多参数）的技术，同时 可以对特定群体加以分选  研究对象为生物颗粒，如各种细胞、微生物及人工 合成微球等  研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征，并加 以定量 流式细胞仪工作原理 流式细胞仪的工作原理：在一定压力下，鞘液带着样本流进入流动 室，液流经激光束照射到细胞，产生光信号，一个在激光束直线方向上 接收到的前向角散射光信号，其余的是在激光束垂直方向上接收到的光 信号，包括侧向角散射光和细胞所标记的荧光素被激光激发后发射出荧 光信号。散射光信号和荧光信号被相应的接收器接收后，转换成电信号 ，经过放大，再经过数字化处理输入电脑并储存，根据细胞的散射光和 荧光就能反映出每个细胞的物理和生物学特征。 2 流式细胞仪的组成 流路  流动室  鞘液SHEATH 5 6  样本流SAMPLE 单细胞悬液5*10 ~5*10 个/ml 光路  光源  滤片  光电倍增管PMT HV 电路  放大电路HV及GAIN 增益  A/D转换 统计  计算机 一、液流系统 样品流动池 鞘液 喷嘴 荧光信号 激发光 3 二、光路系统 光学信号包括散射光信号和荧光信号。 散射光信号包括前向角散射光和侧向角散射光。 前向散射角（FS）和侧向散射角（SS ） 前向角散射光（Forward Scatter Channel, FSC)是指与激光照射 方向平行的细胞散射光，与被测细胞的大小有关。 4 前向散射角（FS）和侧向散射角（SS ） 侧向角散射光（Side Scatter Channel, SSC）是指与激光束正交90度 方向的散射光信号，反映细胞内精细结构和颗粒性质的信息。 散射光测量原理 为细胞固有的物理及生理特性，可依此对未染色的细胞进行分析 5 散射光的性质 外周全血细胞散射光双参数点图 （红细胞溶解后） S F SC 荧光信号