液相色谱分析方法及其应用-2013.5.26.pdf

高效液相色谱分析法 High Performance Liquid Chromatography 晓兰研究员 中国广州分析测试中心 内容提要 一．基本概念 二．HPLC 的主要类型及其原理 三．仪器基本构造及特点 四．定性与定量方法 五．样品前处理方法 六．HPLC方法的选择 2013-5-28 1 一．基本概念 2013-5-28 2 （一）概 述 o 高效液相色谱法（HPLC）是上世纪70年代初发展起来的一 种分离分析技术。 o 它由柱色谱发展而来。在技术上采用了高压泵、高效固定 相和高灵敏度检测器，因而具备分析速度快、分离效率 高、检测灵敏度高、操 自动化的特点。 *.初期称为高压液相色谱、也称高速液相色谱。 o HPLC 目前已成为应用最为广泛的化学分离分析的重要手 段。 2013-5-28 3 （二）HPLC与经典柱色谱的比较 高效液相色谱法比起经典柱色谱法的最大优点在于： 高速、高效、高灵敏度、高自动化。 l 高效——具有颗粒极细(一般为10mm 以下)、规则均匀的固定相，传质 阻力小，柱效高，分离效率高； l 高速 指在分析速度上比经典柱色谱法快数百倍。经典柱色谱是重 力加料，流出速度极慢；而高效液相色谱配备了高压输液设备，流速最 高可达10mL/min 。 l高灵敏度 配备高灵敏度检测器，较经典柱色谱的灵敏度大大提 高。紫外检测器检测限可达10-9g，而荧光检测器检测限可达10-12g 。 l高自动化 配备了计算机系统，可实现从进样到测试报告打印的全 自动化，极大提高了工 效率。 2013-5-28 4 （二）HPLC与经典柱色谱的比较 经典柱色谱 高效液相色谱 色谱柱：柱长50~200cm，内径 色谱柱：柱长10~25cm，内径 10~50mm 2~10mm 常压或减压 高压，40~50MPa 填料颗粒大，75~600mm(200~30 目) 填料颗粒小，2~50mm(2500~300 目) 柱效低，20~50/m 柱效高，3000~20000/m 分析速度慢，1~20h 分析速度快，0.05~1.0h 色谱柱寿命短，用一次需再生 色谱柱寿命长，可进样 百针 不能在线检测 能在线检测 2013-5-28 5 （三）HPLC与GC的比较 GC HPLC 基本理论 塔板理论，速率理论； 塔板理论，速率理论； 与参数 保留值，分离度，分配系数等 保留值，分离度，分配系数等 固定相