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第四章-第五讲-结晶、浓缩、干燥、成型和检测指标
第七节酶液的结晶、浓缩、干燥与成型
第八节酶液的结晶、浓缩、干燥与成型
一、结晶
1、结晶的一般原理
结晶是指控制适当的条件,使溶液中的溶质以
晶体形态从溶液中析出的工艺过程。
(无排列排
不饱和 饱和 过饱和 析出沉淀 (快)
队机会)
溶液 溶液 溶液
析出结晶 (慢)
2、结晶“三步曲”
稍微越过饱和状态,处于介稳态,浓
第一步:形成过饱 缩、降温、调节pH至pI,可使溶液
和溶液 趋于过饱和。
过饱和溶液在一定条件下可形成极微
第二步:形成晶核 小的有序排列的固相物,成为后续晶
体生长的核心,称为晶核。
第三步:晶体生长 溶质在晶核周边不断有序排列,晶体
逐步长大。
3、结晶条件
(1)酶的纯度——一般酶纯度应达到50% 以上。
(2 )酶蛋白的浓度——对大多数酶来说,蛋白质浓
度在3~50mg/mL 较好。
(3 )晶种——有些不易结晶的酶,需加入微量的晶
种才能形成结晶。
(4 )温度—— 一般控制在0~4℃范围内。
(5 )pH值——一般选择在被结晶酶的pI值附近。
4、酶结晶的方法
(1)盐析法
(1)平衡透析法
(2)有机溶剂结晶法
(2 )气相扩散法
(3)pH值或温度诱导法
(1)盐析结晶法
饱和(NH ) SO 溶液
4 2 4
低温静置
浑浊状态
(2 )有机溶剂结晶法
有机溶剂
冰箱中静
置1-2h
离心除沉淀
冰浴 浑浊状态
低温静置
(3 )pH诱导结晶法、温度诱导结晶法
酸或碱
①等电点结晶法 ②温度诱导结晶法
(4 )平衡透析法
盐析结晶法、有机溶剂结晶法、等电点结晶法
派生
平衡透析法
透析袋
酶液
盐溶液(或有机溶剂或接近酶pI
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