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第四章 水中的细菌学测定 四、水中总大肠菌群的测定 总大肠菌群是指那些能在37 ℃ 48h之内发酵乳糖产酸产气的、需氧及 兼性厌氧的革兰阴性的无芽孢杆菌。总大肠菌群的检验方法中，多管发酵 法可适用于各种水样（包括底泥），但操作较繁锁，需要时间较长；滤膜 法主要适用于杂质较少的水样，操作简单快速。 如果是使用滤膜法，则总大肠菌群可重新定义为：所有能在含乳糖的 远藤培养基上，于37 ℃培养24h之内生长出带有金属光泽暗色菌落的、需氧 和兼性厌氧的革兰阴性无芽孢杆菌。 粪便中存在有大量的大肠菌群细菌，在水体中存活时间和对氯的抵抗 力等与肠道致病菌，如沙门氏菌、志贺氏菌等相似，因此将总大肠菌群作 为水体受粪便污染的指示菌是合适的。但在某些水质条件下，大肠菌群在 水中能自行繁殖，这是不利之处。 第四章 水中的细菌学测定 四、水中总大肠菌群的测定 （一）多管发酵法 多管发酵是根据大肠菌群细菌能发酵乳糖、产酸产气以及具 备革兰染色阴性、无芽孢、呈杆状等有关特性，通过3个步骤进行 检验，以求得水样中的总大肠菌群数。 多管发酵法是以最可能数（most probable number, MPN）来 表示试验结果的。 第四章 水中的细菌学测定 四、水中总大肠菌群的测定 （一）多管发酵法 1、培养基 （1）乳糖蛋白胨培养液 蛋白胨 10g 氯化钠 5g 牛肉浸膏 3g 1.6 ％溴甲酚紫乙醇溶液 1mL 乳糖 5g 蒸馏水 1000mL 将蛋白胨、牛肉膏、乳糖、氯化钠加热溶解与1000mL蒸馏水 中，调节pH为7.2～7.4 。再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充 分混合均匀，分装于含有倒置的小玻璃管的试管中，于高压蒸汽 灭菌器中，在115℃灭菌20min ，贮存于暗处备用。 第四章 水中的细菌学测定 四、水中总大肠菌群的测定 （一）多管发酵法 1、培养基 （2）三倍乳糖蛋白胨培养液 根据实际需要，也可按上述配方比例（除蒸馏水外）配成二倍、 三倍或五倍浓缩的乳糖蛋白胨培养液，制法同上。 第四章 水中的细菌学测定 四、水中总大肠菌群的测定 （一）多管发酵法 1、培养基 （3 ）品红亚硫酸钠培养基（多管发酵法用） 蛋白胨 10g 蒸馏水 补足至1000mL 乳糖 10g 无水亚硫酸钠 5g左右 磷酸氢二钾 3.5g 5 ％碱性品红乙醇溶液 20mL 琼脂 20-30g ①贮备培养基。先将琼脂加至900mL蒸馏水中，加热溶解，然后加入磷酸 氢二钾及蛋白胨，混匀使其溶解，再以蒸馏水补足至1000mL，调整pH为 7.2-7.4 。趁热用脱脂棉或多层纱布过滤，再加入乳糖，混匀后定量分装于 烧瓶内，置高压蒸汽灭菌器中，在115℃灭菌20min ，贮存于冷暗处备用。 第四章 水中的细菌学测定 四、水中总大肠菌群的测定 （一）多管发酵法 1、培养基 （3 ）品红亚硫酸钠培养基（多管发酵法用） ②平板培养基。将上述贮备培养基加热融化。以无菌操作，根据 瓶内培养基的容量，用灭菌辅助设计管按1 ：50的比例吸取一定量的5% 碱性品红乙醇溶液置于灭菌空试管中，再按1 ：200的比例称取所需的无 水亚硫酸钠置于另一灭菌空试管中，加灭菌水少许使其溶解，再置于 沸水浴中煮沸10min灭菌。用灭菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠溶液滴加 于碱性品红乙醇溶液内至深红色褪成淡红色为止（不宜多加）。将此 混合液全部加入已融化的贮备培养基内，并充分混合（防止产生气 泡）。立即将此种培养基适量（约15mL）倾入已灭菌的空平皿内，待 其冷却凝固后，倒置冰箱内备用。