荧光定量PCR技术和原理详细讲解.pdf

7500 Real-Time PCR 安装培训 China Service Department 内容简介 内容简介 ● 一、基本原理 ● 二、化学原理 ● 三、技术应用 ● 四、实时定量PCR概述 ● 五、仪器软件（现场演示） 一、基本原理 一、基本原理 什么是Real-time PCR? 什么是Real-time PCR? 实时监控特定核酸目标序列PCR扩增的技术 Technology to monitor, in real-time, the PCR amplification of specific nucleic acid targets Real-time PCR是如何实现的? Real-time PCR是如何实现的? ● 和传统PCR一样具有以下基本要素dsDNADNA 模版, primers引物, dNTPs核苷酸, PCR buffer 缓冲液, Taq polymeraseDNA聚合酶等 T G A G T A C G G A C TGCAAACAGATTAGACATAGATAGACAGATTAGATAGACTTAGATGTTTGGCA ACGTTTGTCTAATCTGTATCTATCTGTCTAATCTATCTGAATCTACAAACCGT Mg2+ 2+ Mg2+ Mg Mg2+ Mg2+ Mg2+ Real-time PCR是如何实现的? Real-time PCR是如何实现的? ● 在控温模块（Temperature Block ）上实现循环 反应 » Denaturating of template （模板变性） »Annealing of oligos （引物退火） N个cycles » Extension of primers to make new products （序列扩增） Real-time PCR是如何实现的? Real-time PCR是如何实现的? ● 在PCR混合液中含有荧光物质（fluorescence ） 荧光物质（fluorescence ） Real-time PCR是如何实现的? Real-time PCR是如何实现的? ● Real-Time PCR仪包括thermal block控制温度, halogen lamp 激发荧光, filters, 和CCD camera检 测信号 Halogen lamp Excitation / emission filters CCD camera Thermal cycling block Real-time PCR是如何实现的? Real-time PCR是如何实现的?