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细胞转染技术 刘雅静 yjl@ 生命科学实验中心340 2008-11-4 1 主要内容 细胞转染途径 常规转染方法的原理、应用及特点 细胞转染常用的报告基因 细胞转染注意事项 G418的转染实验 影响转染效率的主要因素 影响转染效率的主要因素 RNA i 2008-11-4 2 转染技术是指将外源分子如DNA，RNA等导入真核细胞的技 转染技术是指将外源分子如DNA，RNA等导入真核细胞的技 术，它是研究基因表达调控，突变分析等的常规工具。 术，它是研究基因表达调控，突变分析等的常规工具。 阳离子脂质体介导的转染 2008-11-4 3 细胞转染途径 物理介导 化学介导 生物介导 2008-11-4 4 物理介导 电穿孔法 显微注射 基因枪 2008-11-4 5 电穿孔法 电穿孔靠脉冲电流在细胞膜上打孔而将核酸导入细胞内。 2008-11-4 6 电穿孔法的特点 优点：转染效率较高 缺点： 需要昂贵的仪器 （电穿孔仪）。 对细胞的损伤较大，每次转染需要更多的细胞 和DNA。 每种细胞电转的条件都需要进行多次优化。 电脉冲和场强的优化对于成功的转染非常 重要，因为过高的场强和过长的电脉冲时间会 不可逆地伤害细胞膜而裂解细胞。 2008-11-4 7 显微注射 2008-11-4 8 显微注射的特点 优点：转染效率较高，可用于稳定转染和瞬 时转染。 缺点：在导入DNA 时需要一个细胞一个细胞 地注射，不适合大量转染细胞研究的需要。 适用于制备转基因动物 2008-11-4 9 基因枪 基因枪依靠携带了核酸的高速粒子而将核酸 导入细胞内。 可以将大分子导入细胞。 2008-11-4 10 化学介导 磷酸钙共沉淀法 脂质体转染方法 多种阳离子物质介导 2008-11-4 11 磷酸钙共沉淀法的原理 磷酸钙被认为有利于促进外源DNA与靶细胞