PH0534 CCK8 试剂盒(Cell Counting Kit-8)操作手册.pdf

PH0534|CCK8试剂盒（CellCounting Kit-8） 货号 PH0534 PH0534-100|100T(1ml) 规格 PH0534-500|500T(1ml×5) PH0534-1000|1000T(1ml×10) CCK溶液在避光，0-5℃的条件下可以保存6个月以上，如长期保存，可在-20℃下保存2年以上，经常使用试剂存放 存储 在0-5℃ ，为防止背景值增加干扰实验结果，请勿反复冻融。 ■ 产品简介： CellCountingKit(CCK试剂盒)细胞增殖与活性检测试剂盒是一种基于WST-8 （2- （2-甲氧基-4硝基苯）-3-(4-硝基苯)-5- （2,4-二磺基 苯）-2H-四唑单钠盐），WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙 黄色的水溶性的甲臜染料（formazan ，参考图1）。WST-8被细胞内脱氢酶生物还原后生成的甲臜能够直接溶解在培养基中。细胞增殖越 多越快 ，则颜色越深 ；细胞毒性越大 ，则颜色越浅。对于同样的细胞 ，生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比 ，颜色的深浅和细胞数 目呈线性关系。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。 本试剂盒提供了一种灵敏度高，操作简便，使用安全的细胞增殖与活性检测方法。 与传统的MTT实验相比优势明显： ★ MTT实验生成的甲臜不是水溶性的 ，需要使用DMSO等有机溶剂溶解 ；而本方法产生的甲臜是水溶性的 ，不仅省去了溶解的步骤 ，更 因此而减少了该操作步骤带来的误差。 ★ 与MTT方法相比，本方法线性范围更宽，灵敏度更高。 ★ 本方法对细胞无毒性，可以多次测定，选取最佳测定时间。 ★ 本方法所用试剂在培养基中比MTT更加稳定，实验效果重复性好。 ★ MTT具有毒性，同时其生成的甲臜需要有机溶剂溶解，会对操作人员身体造成危害。本试剂无毒，使用中无需有机溶剂，操作更加安 全。 ★ 使用无需配制，即开即用。 本试剂盒可以用于生物活性因子的活性检测 ，抗肿瘤药物的筛选 ，细胞增值的测定 ，细胞毒性检测以及药敏等与细胞活性和增殖相关的实 验。本试剂盒使用方便 ，试剂盒包含一管已经配制好的含有WST-8的CCK溶液 ，即开即用 ，无需其他准备步骤。检测过程也无需采用额 外的步骤去溶解甲臜，可直接使用96孔板或者384孔板在酶标仪上检测，适合大规模，高通量的样品检测。 1 参考图1 ★简单！安全！重现性好！ 无需有机溶剂和放射性同位素，步骤少，无损失，结果准确 CCK法 MTT法 还原后的Formazan是水溶性的 还原后的 Formazan是非水溶性的 1 （不需要溶解） （需要加有机溶剂溶解） 2 重现性好 重复性差 3 操作简单 操作繁琐 4 测定波长：450～490nm 测定波长：550～600nm 5 为1瓶溶液，无需预制，即开即用 由于需要加有机溶剂溶解，工作量大 ★灵敏度高！ 灵敏度高于 MTT,XTT和MTS! 2 使用方法（以96孔板为例，其他规格培养板按实际情况安排）： 1. 在96孔板中配置100μl的细胞悬液（通常细胞增殖实验每孔加入100μl2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100μl5000个细胞。 具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等因素决定 ）。按照实验需要，进行培养（在37