一种山羊品种 SSR 分子标记鉴定方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局 *CN101914626A* (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 101914626 A (43)申请公布 日 2010.12.15 (21)申请号 201010267416.1 (22)申请 日 2010.08.27 (71)申请人 同济大学 地址 200092 上海市四平路1239 号 (72)发明人 杨姣 刘志学 陈士超 罗倩倩 郑佩培 (74)专利代理机构 上海智信专利代理有限公司 31002 代理人 吴林松 (51) Int.C l. C12Q 1/68 (2006.01) C12N 15/11 (2006.01) 权利要求书 2 页 说明书 13 页 附图 4 页 (54) 发明名称 一种山羊品种SSR 分子标记鉴定方法 (57) 摘要 本发明公开了一种山羊品种SSR 分子标记鉴 定方法，主要包括：从样品中随机抽取血样，用树 脂型TM基因组DNA 提取试剂盒提取基因组DNA ；筛 选SSR 引物，用每一对SSR 引物对不同山羊DNA 模 板进行PCR 扩增，对扩增产物进行电泳检测，从中 筛选出扩增结果有差异的引物，用于山羊的品种 鉴定；利用PopGene32 计算等位基因组成及其频 率，通过群体杂合度、多态信息含量、遗传距离等 遗传参数的分析进行准确鉴定品种。本发明提供 的鉴定山羊品种的SSR 分子标记方法稳定可靠， 不受生长季节和年龄差异的影响，为山羊品种的 鉴定、选育和评价提供了科学依据。 A 6 2 6 4 1 9 1 0 1 N C CN 101914626 A 权 利 要 求 书 1/2 页 1. 一种山羊品种SSR 分子标记鉴定方法，包括以下步骤 ： TM (1) 在拟鉴定山羊品种与标准对照样品中随机抽取血样，用树脂型 基因组DNA 提取 试剂盒提取基因组DNA ； (2) 筛选SSR 引物，用每一对SSR 引物对不同山羊DNA 模板进行PCR 扩增，对扩增产物 进行电泳检测，从中筛选出扩增结果有差异的引物，用于山羊的品种鉴定； (3) 利用所筛选的SSR 引物对所鉴定山羊的基因组DNA 进行遗传参数的分析，计算各 个山羊群体在SSR 座位上的等位基因组成及其频率，各个群体的基因杂合度和多态信息含 量，并计算两群体间遗传距离； (4) 根据基因杂合度和多态信息含量判定所鉴定山羊品种是原种还是其杂交后代 ； (5) 通过分析两个群体之间遗传距离值，确定是否是同一品种 ； (6) 利用PopGene32 软件对所鉴定山羊品种与对照品种进行聚类，确定是否属于同一 品种。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的筛选SSR 引物的要求是获得2-6个 等位基因；等位基因分子量的差异在4bp 以上；扩增条带清晰可辨；重复验证时，条带大小 误差不得超过2bp。 3. 根据权利要求1 所述的方法，其特征在于：所述步骤 (2) 中，进行PCR 扩增时，采用 下述扩增体系： 10ul 扩 增 体 系 中含 有：10×PCR Buffer (Mg2+Free)1ul，10mmol/L dNTP 0.8ul， 25mmol/LMgCl20.6ul，20umol/L 两侧引物各0.25ul，Taq DNA 聚合酶0.5U，模板10ng，用超 纯水补足10ul。 4. 根据权利要求1 所述的方法，其特征在于：所述步骤 (2) 中，进行PCR 扩增时，采用 PCR 扩增程序为： 94℃