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2015至2016学年高二生物人教版选修3课件2.2 动物细胞工程.
单克隆抗体的制备—极富创造性的方案 将能够产生特定抗体的B淋巴细胞和具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞融合在一起,形成杂交瘤细胞。杂交瘤细胞既能在体外快速生长,又能持续分泌成分单一的特异性抗体。这种单一类型的只针对某一特定抗原决定簇的抗体分子,就是单克隆抗体。 米尔斯坦(阿根廷)和科勒(德国)因此在1984年获诺贝尔奖。 杂交 细胞 灭活的病毒等手段 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞 经免疫的小鼠 提取 杂交瘤细胞 第一次筛选 用特定的选 择性培养基 第二次筛选 能产生特定抗体、培养条件下能无限增殖的杂交瘤细胞 体外培养 注射到小鼠腹腔 提取单克隆抗体 1、动物特异性免疫 2、分离B淋巴细胞(B);找到骨髓瘤细胞(G)。注意B淋巴细胞是一个系列。(B1,B2,B3,---Bn) 3、细胞融合——三种融合方式:(BB;BG;GG) 4、第一次筛选:在“选择培养基培养”上培养筛选杂交瘤细胞(只有BG杂交瘤细胞存活。但BG杂交瘤细胞也是一个系列:如B1G,B2G---BnG。而BB,GG在此培养基上不能存活。) 5、第二次筛选:在“多孔培养板上”培养杂交瘤细胞系列 ,每孔只放一个杂交瘤细胞。“克隆化培养”每个杂交瘤细胞,并进行“单一抗体检测”,“检测阳性”的孔内即是所需要的杂交瘤细胞。 6、选择所需要的杂交瘤克隆细胞群,体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖。 7、提取单克隆抗体。 1、单抗的制备过程要点: 3)、为何要进行两次筛选? 4)、如何进行第2次筛选? 培养在多孔培养板上,每孔只有一个杂交瘤细胞。 第1次筛选得到杂交瘤细胞(多种)。第2次筛选得到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞群。 问题强化: 1)、本过程利用了哪些原理? 免疫原理,细胞融合原理和动物细胞培养原理 2)、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合? 这样融合成的杂交瘤细胞,继承了双亲细胞的遗传物质,不仅具有B细胞分泌抗体的能力,而且还有无限增殖的本领,因而可以获得大量单克隆抗体 1、作为诊断试剂:在临床生化诊断、病理组织定位、体内肿瘤的定位等,与常规抗体相比,具有准确、高效、简易、快速特点. 2、用于治疗疾病和运载药物: 主要用于癌症治疗。 生物导弹:抗癌细胞的单克隆抗体+放射性同位素+化学药物或细胞毒素。(单克隆抗体:导向。准确找到癌细胞位置,原位杀死癌细胞。) 2、单克隆抗体的优点: 特异性强,灵敏度高,可大量制备。 3、单克隆抗体的应用 例题1: 1975年,英国剑桥大学分子生物学实验室的科勒和米尔斯坦,把小鼠的淋巴细胞(脾细胞)和小鼠的骨髓瘤细胞融合起来,成为杂交瘤细胞,实现在体外大量生产抗体的目的。实验过程如图所示。 (1)淋巴细胞能与骨髓瘤细胞融合成一个细胞,两种细胞膜也能“融合” 在一起,说明细胞膜 。 (2)单克隆抗体的准确定义应为 ( ) A.一类特殊抗体 B.无性繁殖系 C.单一抗体细胞的无性繁殖第产生的抗体 D.单一抗体细胞的有性繁殖系产生的抗体 (3)杂交瘤细胞繁殖进行的是_______分裂,其遗传性状__________。 (4)单克隆抗体注入体内后可以自动追踪抗原(病原体或癌变细胞等)并与之结合,而绝不攻击任何正常细胞,故称为“生物导弹”这是利用了 _____________ 。 具有一定的流动性 C 有丝 不变 抗体能与抗原发生特异性结合的特点 例题2 (1)在用动物细胞融合技术制备单克隆抗体时, 将抗原注射到小鼠体内,可获得(多选) ( ) A.T淋巴细胞 B.效应B淋巴细胞 C.抗体 D.记忆细胞 (2)下列关于单克隆抗体的制备和应用的叙述中, 正确的是 (多选) ( ) A.B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合,一般需要灭活的仙台 病毒或聚乙二醇诱导 B.融合后形成的杂交瘤细胞既能无限增殖,又能产生单克 隆抗体 C.体外培养时,一个B淋巴细胞可以产生一种抗体,但不 能无限增殖 D.单克隆抗体与常规抗体相比,特异性强,灵敏度高, 优越性明显 BCD ACD 已知细胞合成DNA有D和S两条途径,其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径,但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径,但能不断分裂增殖,将这两种细胞在试管中混合,加聚乙二醇促融,获得杂种
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