棉花黄萎病菌低致病力突变体的表型分析及致病相关基因克隆.pdf

植物病理学报 ACTAPHYTOPATHOLOGICASINICA 45(3)：258—269(2015) doi：10．13926／j．cnki．apps．2015．03．005 棉花黄萎病菌低致病力突变体的表型 分析及致病相关基 因克隆 刘义杰 ，李志芳 ，冯 自力 ，赵丽红。，周芳芳 ，师勇强 ，杨家荣 ，朱荷琴 (旱区作物逆境生物学国家重点实验室／西北农林科技大学植物保护学院，杨凌 712100； 。棉花生物学国家重点实验室／中国农业科学院棉花研究所，安阳455000；) 摘要：本研究通过对菌核型强致病力菌株Vd080产生的800个T—DNA插入突变体进行致病力测定，筛选得到3l株致病力极 显著降低的突变体，并对其进行了生物学性状分析。分子验证结果表明，这些低致病力突变体均为阳性，且有25株的T—DNA 为单拷贝插入 与野生型菌株Vd080相比，这25株低致病力突变体菌落形态变异丰富，除了8株与野生型菌株形态一致的茵 核型突变体外．还有3株黄色菌丝型，2株白色菌丝型和l2株中间型突变体。此外 ，多数突变体的生长速率、产孢量和粗毒素 产量都发生了显著变化，且各生理指标之间并无明显相关性。借助TA1L—PCR技术和VdLs．17的基因组数据库，进一步获得 了这25株单拷贝插入低致病力突变体T—DNA的侧翼序列，并从vd080中成功克隆得到了影响黄萎病菌致病力的相关基因。 关键词：大丽轮枝菌；低致病力突变体；生物学性状；侧翼序列分析；基因克隆 Phenotypic analysis of lOW ViruIent Verticillium dahliae mutants on cotton and cloningofpath0genicity relatedgenes LIU Yi-jie LIZhi—fang，FENGZi_l-i-，ZHAOLi— hong ，ZHOU Fang—fang ，SHIYong—qiang ，YANG Jia-rong ，ZHU He—qin (CollegeofPlantProtection， NorthwestAFUniversity，Yangling712100，China； StateKeyLaboratoryofCottonBiology／InstituteofCottonResearchof ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Anynag455000，China；) Abstract：800 T—DNA inserted mutnats ofhigh virulent Verticillium dahliae strain Vd080 producing microsclerotiawereconductedpathogenicitytests．Amongthem ，htevirulenceof31mutantsexhibitedsignificant reduction．andtheirbiologicalcharacteristicswasanalyzed．Theresultsofmolecularidentificaftonshowed that al1the1OW virulentmutnatswerepositivenad25mutna tshadsingleT DNA inserted．Compared wiht htewi1d tVpesrtainVd080．themutna tcoloniesshoweddiverseV ation．Am onghtem ，8mutna tsweresimilar、ⅣitIlwild typeproducingmicrosclerotia，therewerealso3yellow mycelia，2white mycelianad 12intermediate strains． Furthermore，hte growth rate，sporeyield na d crude toxin ofmoststrainschanged significantly，butthe correlationamonghtesephysiological indicatorswasnotsignificnat．W ithhteaidofTAIL·PCR techniquena d VdLs．17genomedatabase，hteflankingsequenceso