生物制品的灭活剂、佐剂及保护剂.pdf

第四章 兽医生物制品的 灭活剂、佐剂及保护剂 【知识目标】 ·熟悉兽医生物制品生产中常用的灭活剂、佐剂及保护剂； ·理解灭活剂、佐剂及保护剂在兽医生物制品生产中的作用； ·掌握 ·灭活剂、佐刺、保护剂的概念； ·影响灭活剂作用的因素； ·影响保护剂效能的因素。 ·了解 ·佐剂的基本要求及类型； ·保护剂的组成、效能。 【能力目标】 ·能进行白油佐剂的乳化。 第一节 灭活与灭活剂 为了提高兽医生物制品的安全性、防止散毒，许多疫苗通常通过灭活制成无毒力和无 感染性的制品，灭活乃是兽医生物制品中的一项基本技术。 一、灭活及灭活剂的概念 灭活(inanimation)，是指破坏微生物的生物学活性、繁殖能力及致病性，但尽可能不影 响其免疫原性，用以制备灭活疫苗。广义的灭活尚包含灭能(inactivation)，即使一些活性物 质(微生物及其代谢产物、激素、酶、血清因子和抗体等)丧失活力的过程。各种灭活疫苗、 诊断抗原等的制造过程均属于灭活；血清经 56℃加热30min 处理，使补体丧失活性、破坏 某些抑制因子的过程，以及破伤风毒素经甲醛处理后即失去致病性成为类毒素的过程均为灭 能。用来灭活的药物称为灭活剂，又称化学灭活剂。化学灭活是制备灭活苗最重要的手段。 二、灭活的类型 按其灭活作用的性质可将灭活分为物理灭活和化学灭活两类，尤以化学灭活法效果确 实、方法简便而最为常用。但不同的微生物、活性物物质采取灭活方法、灭活剂也不尽相同， 因此，选择合适的灭活剂和灭活方法对研制灭活兽医生物制品十分重要。 (一)物理灭活 一般常用热灭活、超声波灭活、紫外线灭活和γ射线灭活等方法杀死微生物或消除其 毒性。 热灭活最早由Smith 等研制猪霍乱灭活菌苗时提出，后来发现热灭括容易发生菌体蛋白 质变性。过去用加热灭活方法者较多。该法简单易行，但加热杀死微生物的方法比较粗糙， 容易造成菌体蛋白质变性，凶而免疫原性受到明显影响。超声波裂解细胞灭活应放在水浴中 间断进行。紫外线灭活效果不够好，曾发生过经紫外线灭活的强毒重新活化的例子。γ射线 灭活应根据被照射物的容量大小选择照射距离和照射强度。 目前，除诊断抗原尚采用物理灭活(主要是热灭活)外，一般很少使用。 (二) 、化学灭活 利用化学药品或酶使微生物、活性物质的一些结构发生改变，从而丧失生命力、感染 性、毒性或活性。化学灭活法是目前采用最多的灭活法，但化学灭活的技能常受灭活剂种类、 剂量和作用温度、pH 、时间等因素影响，因此必须筛选最佳的灭活条件。 在特定条件下，物理灭活与化学灭活也可联合用于某些生物制品的灭活。 三、常用灭活剂 早在 1911 年，Lowenstein 和Eisler 就用甲醛处理破伤风毒素，使之脱毒而成类毒索。 以后，Puntoni(1924) 以0.1 ％苯酚或0.1 ％甲醛处理制成犬瘟热灭活苗，Dorset 等(1934，1936) 用结晶紫灭活猪瘟病毒制成猪瘟结晶紫疫苗。至20 世纪80 年代，随着化学灭活剂研究的快 速发展，已筛选出不少效果优良的灭活剂。 (一) 、甲醛 甲醛是最传统的同时也是应用最广的灭活剂，至今仍是生物制品研究与制造中最主要 的灭活剂。我国卫生部1979 年颁发的《生物制品规程》中所写的灭活疫苗毒16 种，其中用 甲醛灭活的疫苗占81 ％；农牧渔业部1984 年发布的《兽医生物制品制造及检验规程》中的 20 种灭活疫苗，以甲醛灭活者达 17 种，占85 ％。农业部2000 年发布的《兽医生物制品制 造及检验规程》中的26 种灭活疫苗，均以甲醛作为灭活剂。 甲醛为无色气体，易溶于水和乙醇，水溶液称为福尔马林，通常浓度为 36 ％～40 ％， 能与水、醇、丙酮任意混合，pH2.8～4.0 。无色透明，有强烈的刺激性。甲醛为强还原剂， 在微碱性时还原性高，在空气中能缓慢氧化成甲酸。长期或低温保存易变混浊，形成三聚甲 醛（HCHO ） 加热后可变澄清，但灭活性能降低。一般商品甲醛溶液中常加入 l0 ％～15％ 3 的甲醛，以防止聚合。 甲醛的灭活机制是还原作用，低浓度时能破坏微生物的生命链，从而丧失活力或毒