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麦克奥迪（厦门）医疗诊断系统有限公司 培训教材 细胞DNA定量分析技术指导手册 二○一二年二月 目录 一．半定量液基细胞学制片操作指南 ………………………… - 1 - 二. DNA 染色程序（Feulgen 染色）……………………………- 7 - 三. MotiCytometer 1.1操作手册……………………………… - 9 - 四. Classify软件介绍及操作说明…………………………… - 21 - 五. 质控标准片数据分析……………………………………… - 35 - 六. DNA报告解读及实例分析……………………………………- 38 - 七. HIS资料管理系统使用说明…………………………………- 65 - 八. 实验室仪器维护保养 ………………………………………- 78 - 附录1：细胞DNA倍体定量检测标本满意及发放报告条件…… - 82 - 附录2：MotiCytometer简要使用流程………………………… - 83 - 附录3：数据分析注意事项及常用诊断语言建议………………- 84 - 附录4：HIS资料管理系统简要操作流程……………………… - 85 - 附录5：实验室应急处理方案……………………………………- 86 - 附录6：巴氏染色程序及染色过程中注意事项…………………- 88 - 附录7：有关标本和试剂存放的规定及注意事项………………- 91 - 附录8：半定量制片细胞沉淀及稀释体积对照图………………- 93 - 半定量液基细胞学制片操作指南 1．处理载玻片 制片前，将载玻片预先放置于玻片架上，随后放入配制好的粘片剂中，浸泡 至少10分钟。将浸泡好的玻片拿出，在滤纸上吸干，晾干后备用（载玻片应至少 提前2-3小时处理完毕）。 粘片剂稀释方法：220ml 蒸馏水中加入2ml粘片剂，可处理400-800张载玻 片。稀释后的粘片剂室温下使用不超过1周。 2．标本确认并编号 取待检标本管和申请单，分别用记号笔在标本管和申请单上标上流水号，在 试管架中准备好与标本管相对应的1支离心管（10ml左右）和2支圆底试管（5ml 左右，一支用于DNA制片，另一支用于TBS 制片），离心管用记号笔标上编号， 此编号与标本管编号应一致，圆底试管上可分别标上“D”（用于DNA制片）和 “T”（用于TBS制片）。 3．排列玻片 制片前，用试管架的底面将编好号的玻片依次沿水平滴片板上的白色平行线 排列整齐，平行线中下方的一条用于对齐玻片的底边缘，上方的一条用于指示滴 - 1 - 片的位置（如果暂时没有滴片板，则在干净水平的桌面上用铅笔画两条相距3cm 的平行线代替）。 4．添加细胞分散剂 分别向每个圆底试管中加入100 μl的细胞分散剂。 5．转移标本、离心 将标本瓶放在点触式混匀器上振荡3-5秒，缓缓向尖底离心管中倒入6ml左 右的标本溶液。离心管经平衡后放入离心机，离心速度设置为1500转/分钟，时 间设置为5分钟，开始离心。 6．倒上清 离心完成后，逐个将离心管中的上清液倒出，并在滤纸上尽量吸尽管内的残 余液体，此时可观察到离心管底部有沉淀的细胞团块。注：如果发现细胞沉淀过 - 2 - 少且较为松散，则最好用滴管从上部将管中的上清液吸出，防止细胞被倒出而造 成损失。 7．稀释细胞沉淀 针对每个标本，观察其离心管中细胞沉淀的大小，并将其与示意图（见附 件）上的模拟标本体积逐个进行对比，确定所需的稀释体积，原则上稀释体积为 细胞沉淀体积的2.5-3倍。 根据确定的稀释体积，用可调式移液器向相应的尖底离心管中加入定量的蒸 馏水，如果没有可调式移液器，也可以直接用定量移液器或吸管向离心管中逐滴 加水至示意图中黑线标识的位置。 - 3 - 8．转移细胞悬液 所有离心管中的标本经稀释后，先将第一个标本的离心管放在点触式混匀器 上振荡3-5秒，用吸管吸取适量细胞悬液，向用于DNA制片的圆底试管中加入2滴 细胞悬液，向用于TBS制片的圆底试管中加入1滴细胞悬液。然后用同样的方法转 移下一个标本的细胞悬液，直至所有标本