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高效液相色谱法 分析测试中心：邓文红 电话6001 邮箱：dengwh@bjfu.edu.cn  高效液相色谱的特点  高效液相色谱的种类及分离原理  高效液相色谱仪介绍  高效液相色谱的谱峰扩展  高效液相色谱分离条件的选择  高效液相色谱仪的使用与维护  高效液相色谱仪的简单故障的诊断与维修  超临界流体色谱  毛细管电泳 第一节 概 述 一、简介 液相色谱法是以液体作为流动相的色谱法。 20世纪60-70年代，由于高效固定相、高压泵以 及高灵敏度检测器的发明，使经典液相色谱分 析技术有了新的突破，其分离效率，分析速度 及灵敏度都大大提高，称为高效液相色谱 （High Performance Liquid Chromatography， 简称HPLC。 LC/LC-MS是目前发展最快的分析仪器。 经典LC 薄层LC 高效LC 二、高效液相色谱法的特点 1、优点： 1）高压 （Agilent1100,40Mpa; Agilent1260,60Mpa） 2）高速 （较经典色谱法） 3）高效 （分离效能高，可选择固定相和流动相以达到最佳分 离效果） -9 -11 4）高灵敏度 （高灵敏度的检测器：紫外:10 g，荧光:10 g ） 5）适应范围宽 2、缺点： 1）柱外效应 （死体积会显著地导致色谱峰的加宽） 2）操作技术较GC复杂; 3）分析速度低于GC; 4）溶剂消耗大,成本较GC高;仪器价格较贵。 高效液相色谱法的特点 （续）  3、 HPLC与经典LC区别 主要区别：固定相差别，输液设备和检测手段 1) 经典LC：仅做为一种分离手段 柱内径1 3cm，固定相粒径100μm 且不均匀 ~ 常压输送流动相 ；柱效低（H↑，n↓） 分析周期长、无法在线检测 2) HPLC：分离和分析 柱内径2 5mm，固定相粒径10μm （球形，匀浆装柱） ~ 高压泵输送流动相；柱效高（H↓，n↑） 分析时间大大缩短、可以在线检测 高效液相色谱法的特点 （续）  4、HPLC与GC差别  相同：兼具分离和分析功能，均可以在线检测  主要差别：分析对象、流动相及操作条件的差别 1) 分析对象 GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品，高沸点、 挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚物的样品不可检测， 仅能分析有机物的20%。 HPLC：溶解后能制成溶液的样品，不受样品挥发性和热稳 定性的限制,分子量大、难气化、热稳定性差及高分子和离 子型样品均可检测，用途广泛，占有机物的80%。 高效液相色谱法的特点 2）流动相差别 GC：流动相为惰性气体，组分与流动相无亲合作用力，只 与固定相作用。 HPLC：流动相为液体，流动相与组分间有亲合作用力。  流动相种类较多，选择余地广。  流动相极性和pH值的选择对分离起到重要作用。 3）操作条件差别 GC：加温操作; HPLC：室温；高压（液体粘度大） 高效液相色谱法的特点(续)  检测器大都不破坏样品 可用于分离、纯化、制备，是纯化复杂天 然物的一种重要手段。  HPLC/LC-MS正处于迅猛发展阶段。已被广 泛应用于分析对生物学和医药学有重大意 义的大分子极性物质，例如蛋白质、核酸 、氨基酸、多糖类、植物色素、高聚物、 染料及药物等物质的分离和分析。 三、HPLC的种类及分离原理 根据分离机制的不同，HPLC可分为下述几类：  液－液 (分配)色谱法 [Liguid-Liguid (Partitioning) Chromatography]  液－固 (吸附)色谱法[Liguid-Solid (Adsorption) Chromatography] 