AccQTag 使用手册.pdf

Waters AccQ•Tag 化学试剂包 使用手册 中文翻译版 仅供内部使用 原文版权为Waters 公司所有 目录 第一章 AccQ•Tag 方法简介 衍生化学简介 AccQ•Tag 化学试剂包 第二章 配制AccQ •Fluor 衍生剂 第三章 制备校正标样 制备外标法校正标样 制备内标法校正标样 衍生校正标样 第四章 样品制备 测算样品用量 水解样品 衍生样品 第五章 分离氨基酸衍生物 设置检测器 准备洗脱液和梯度表 进样量准则 评价标样分离情况 第六章 问题解答 衍生反应问题解答 色谱分离问题解答 附录 色谱分离 使用紫外检测器 氨基酸名称缩写及分子量、分子式 第一章 AccQ•Tag 方法简介 本章包括以下小节 衍生化学简介 AccQ•Tag 化学试剂包 1 AccQ•Tag 方法简介 本手册介绍 Waters AccQ•Tag 氨基酸分析方法。 AccQ•Tag 方法是一种用于肽和蛋白质水解氨基酸分析的柱前衍生技术。 AccQ•Tag 方法包括： • 使用 Waters AccQ•FluorTM 反应试剂(享有专利权)衍生氨基酸。 • 使用反向色谱分离衍生物。 • 使用荧光检测定量检测衍生物。 AccQ•Tag 方法特点： • 精确度高 • 灵敏度可达pMol 级 • 易于操作 AccQ•Tag 化学试剂包专为 Waters AccQ•Tag 氨基酸分析系统作了全面优化。其他系统 也许不能达到同样的分析效果。 Waters AccQ•Tag 化学试剂包是严格遵从MiIlipore 的 lSO 9002 认证文件生产的，以确 保氨基酸背景的干扰最小。为保证这一纯度级别，应小心保存和使用所有的试剂。 1.1 衍生化学简介 AccQ•Tag 方法的基础在于专为氨基酸分析而开发的衍生试剂。Waters AccQ•FIuor 衍 生试剂 ( 6- 氨基喹啉基-N- 羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯 6 - aminoquinoIyI - N - hydroxysuccinimidyl carbamate ，即 AQC ) 是含 N - 羟基琥珀酰亚氨基的活性杂环氨基甲酸 酯，它是一种新型氨基衍生化合物，结构如下(图 1-1). O NH O N O N O 图 1-1 Woters AccQ•FIuor 衍生试剂 衍生剂 AccQ•FIuor 衍生剂化学性质： • 可将伯氨基酸和仲氨基酸转化为稳定的荧光衍生物 • 可水解生成6-氨基喹啉——一种不干扰测定的副产物 氨基酸衍生反应 AccQ•FIuor 衍生剂与伯氨基酸和仲氨基酸迅速反应，生成在395nm 发射强荧光的高稳 定性的脲(图 1-2) ，生成的衍生物在室温下可稳定一周。 图 1-2 AccQ•FIuor 衍生反应